hPHGDH基因敲除株（SW1990细胞）

一、产品概述

hPHGDH基因敲除株（SW1990细胞） 是 上海淳麦生物科技有限公司 构建的 PHGDH 基因敲除稳转细胞株，宿主/载体细胞为 SW1990。该产品基于 "PHGDH 功能研究" 需求定向构建，即购即用，可显著缩短研究者自行构建基因编辑细胞株的周期（常规自建需 2-4 个月）。

二、产品名称与长尾关键词

核心检索词：PHGDH 基因敲除细胞株、PHGDH knockout cell line、SW1990 PHGDH KO、PHGDH 稳转细胞、CRISPR PHGDH 基因敲除、PHGDH 功能研究模型。

三、核心参数

四、产品特点

• PHGDH 靶向基因敲除，构建与鉴定围绕该基因位点展开
• 以 SW1990 为宿主背景，便于在熟悉细胞体系中开展机制研究
• 组织来源 胰腺，适配相应组织背景的功能与机制研究
• 冻存管规格发货，复苏后即可进入实验，便于批次管理与保种
• 适用于功能缺失（loss-of-function）机制研究与 rescue 回补实验
• CRISPR/Cas9 位点特异性敲除，双 sgRNA 设计降低脱靶风险
• 无外源抗性基因残留（puro 筛选后去除），背景更干净

五、适用范围

本 PHGDH 基因敲除稳转细胞株主要用于 PHGDH 基因功能缺失（loss-of-function）研究，通过表型对比解析 PHGDH 的生物学功能与调控机制；适用于 rescue 回补实验（回补野生型验证表型归因）、信号通路解析、药物靶点确证与慢病毒包装等场景。宿主细胞 SW1990 便于在熟悉背景下开展机制研究。

六、构建与验证原理

采用 CRISPR/Cas9 系统针对 PHGDH 基因外显子设计 sgRNA，由 Cas9 核酸酶引入 DNA 双链断裂（DSB），细胞经非同源末端连接（NHEJ）修复时产生移码性插入/缺失（indel），使 PHGDH 阅读框提前终止，实现稳定敲除。单克隆经 PCR 扩增靶区段并 Sanger 测序鉴定等位基因突变，确认敲除效率后连续传代验证表型稳定性（SW1990 背景，货号 SHA-KO-0674）。

七、细胞培养方案建议

1. 复苏：自液氮取出 PHGDH 基因敲除株冻存管，37℃ 水浴轻柔晃动至完全融化，转入预温培养基后 100×g 离心 5 分钟洗去 DMSO，重悬接种（SW1990 常规 1–3×10⁵ cells/cm²），于 37℃、5% CO₂ 条件下静置培养，24 小时后首次换液以去除未贴壁细胞与碎片。
2. 培养条件：培养基以 10% FBS 完全培养基为主，可视需要加入双抗防止污染；SW1990 常规每 2–3 天换液，换液前后观察培养基颜色与 pH 变化，及时剔除异常孔/瓶。
3. 传代：SW1990 贴壁株建议汇合度 80%–90% 时传代：PBS 洗涤、0.25% 胰酶 37℃ 消化 1–3 分钟，镜下确认变圆脱壁后以完全培养基终止，离心去酶液，按 1:3–1:6 比例接种；对消化敏感的细胞可采用低浓度胰酶或室温消化。
4. 倍增与接种：倍增时间因细胞系而异（常见肿瘤系 18–36 小时），建议 SW1990 维持在对数期、汇合度不超过 90%，以防止接触抑制与状态漂移。
5. 冻存：冻存前确保细胞处于对数期且无污染，按 1–3×10⁶ cells/mL 重悬于含 10% DMSO 的冻存液，分装后程序降温过夜再转入液氮；标注 PHGDH 基因敲除株、代次与日期便于追溯。
6. 状态复核：建议建立低代次种子库：SW1990 细胞扩增后分批冻存，实验统一使用相近代次，并在关键节点复核 PHGDH 基因敲除株的基因型或表达量，减少遗传漂变带来的批间差异。

八、保存与运输

PHGDH 基因敲除稳转株以冻存管发出（货号 SHA-KO-0674，T25/冻存管）。冻存管请直接置于液氮气相或液相中长期保存，避免 -80℃ 久置导致活力下降；运输全程干冰冷链，签收后请核对细胞状态并及时处理；SW1990 细胞对温度波动较敏感，建议到货当日完成复苏或入库。

九、常见问题（FAQ）

• 能否用本株做 rescue 回补实验？
  可以。PHGDH 敲除株（货号 SHA-KO-0674）适合作为回补实验的受体细胞，转入野生型 PHGDH 表达载体后比较表型，有助于确认表型归因于 PHGDH 缺失而非脱靶效应。
• PHGDH 敲除是否经过验证？
  是。本 PHGDH 敲除株（SW1990）交付前经靶位点 PCR 扩增与 Sanger 测序鉴定，确认移码突变与敲除等位基因，并提供相应验证说明。
• 发货周期与运输方式？
  按平台公示的交期发货，冻存管以干冰、培养瓶以冰袋运输；具体时效受库存与目的地影响，请以下单信息为准。
• 传代比例与消化时间如何把握？
  贴壁细胞常规按 1:3–1:6 传代，0.25% 胰酶 37℃ 消化 1–3 分钟，以细胞变圆、脱壁为准，避免过度消化；具体比例依细胞生长速率微调。
• 是否提供培养基与转染试剂配套？
  本产品为细胞株，配套完全培养基、冻存液、支原体检测试剂与转染试剂可另行采购（见相关产品推荐）。

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十一、产品质控与售后

关于 PHGDH 基因敲除株（SW1990，货号 SHA-KO-0674）：敲除株附靶位点 PCR 扩增与 Sanger 测序验证说明（确认移码突变与敲除等位基因），随货技术资料载明鉴定方法与判读标准。产品科研专用；运输保温、收货复苏与售后时效按平台规则执行，具体疑问可联系售后咨询。