hSETD2基因敲除株（A375细胞）

一、产品概述

hSETD2基因敲除株（A375细胞） 是 上海淳麦生物科技有限公司 构建的 SETD2 基因敲除稳转细胞株，宿主/载体细胞为 A375。该产品基于 "SETD2 功能研究" 需求定向构建，即购即用，可显著缩短研究者自行构建基因编辑细胞株的周期（常规自建需 2-4 个月）。

二、产品名称与长尾关键词

核心检索词：SETD2 基因敲除细胞株、SETD2 knockout cell line、A375 SETD2 KO、SETD2 稳转细胞、CRISPR SETD2 基因敲除、SETD2 功能研究模型。

三、核心参数

四、产品特点

• SETD2 靶向基因敲除，构建与鉴定围绕该基因位点展开
• 以 A375 为宿主背景（人黑色素瘤），便于在熟悉细胞体系中开展机制研究
• 组织来源 皮肤，适配相应组织背景的功能与机制研究
• 冻存管规格发货，复苏后即可进入实验，便于批次管理与保种
• CRISPR/Cas9 位点特异性敲除，双 sgRNA 设计降低脱靶风险
• 适用于信号通路上下游关系解析与遗传互作筛选
• 敲除靶位点明确，便于后续设计引物自行复核基因型

五、适用范围

本 SETD2 基因敲除稳转细胞株主要用于 SETD2 基因功能缺失（loss-of-function）研究，通过表型对比解析 SETD2 的生物学功能与调控机制；适用于 rescue 回补实验（回补野生型验证表型归因）、信号通路解析、药物靶点确证与慢病毒包装等场景。宿主细胞 A375（人黑色素瘤） 便于在熟悉背景下开展机制研究。

六、构建与验证原理

采用 CRISPR/Cas9 系统针对 SETD2 基因外显子设计 sgRNA，由 Cas9 核酸酶引入 DNA 双链断裂（DSB），细胞经非同源末端连接（NHEJ）修复时产生移码性插入/缺失（indel），使 SETD2 阅读框提前终止，实现稳定敲除。单克隆经 PCR 扩增靶区段并 Sanger 测序鉴定等位基因突变，确认敲除效率后连续传代验证表型稳定性（A375 背景，货号 SHA-KO-0600）。

七、细胞培养方案建议

1. 复苏：自液氮取出 SETD2 基因敲除株冻存管，37℃ 水浴轻柔晃动至完全融化，转入预温培养基后 100×g 离心 5 分钟洗去 DMSO，重悬接种（A375 常规 1–3×10⁵ cells/cm²），于 37℃、5% CO₂ 条件下静置培养，24 小时后首次换液以去除未贴壁细胞与碎片。
2. 培养条件：培养基以 10% FBS 完全培养基为主，可视需要加入双抗防止污染；A375 常规每 2–3 天换液，换液前后观察培养基颜色与 pH 变化，及时剔除异常孔/瓶。
3. 传代：贴壁细胞传代采用胰蛋白酶消化：弃培养液，PBS 轻洗 1–2 次，加入 0.25% Trypsin-EDTA，37℃ 孵育 1–3 分钟（镜下见细胞变圆、间隙增大即终止），加入含 10% FBS 的完全培养基终止消化并吹打脱壁，100×g 离心 5 分钟收集细胞，按 1:3–1:6 接种于新培养瓶。消化时间因细胞系而异，避免过度消化。
4. 倍增与接种：多数肿瘤细胞系群体倍增时间约 18–36 小时、正常细胞系约 24–48 小时（以具体细胞系特性为准）；建议汇合度达 80–90% 时传代，避免过度汇合导致分化或凋亡。
5. 冻存：冻存前确保细胞处于对数期且无污染，按 1–3×10⁶ cells/mL 重悬于含 10% DMSO 的冻存液，分装后程序降温过夜再转入液氮；标注 SETD2 基因敲除株、代次与日期便于追溯。
6. 状态复核：长期培养中 SETD2 基因敲除株可能出现表达衰减或亚群漂移，建议定期（如每 10 代）以 PCR/测序或 qPCR/WB 复核 A375 细胞中目标基因状态，必要时回退至低代次种子。

八、保存与运输

本产品（SETD2 基因敲除株，货号 SHA-KO-0600）以冻存管形式交付。冻存管请直接置于液氮气相或液相中长期保存，避免 -80℃ 久置导致活力下降；运输采用干冰保温并全程冷链，到货后请尽快按第七部分方案复苏或转入液氮保存，避免反复冻融影响 A375 细胞活性与 SETD2 编辑状态。

九、常见问题（FAQ）

• SETD2 敲除是否经过验证？
  是。本 SETD2 敲除株（A375）交付前经靶位点 PCR 扩增与 Sanger 测序鉴定，确认移码突变与敲除等位基因，并提供相应验证说明。
• 能否用本株做 rescue 回补实验？
  可以。SETD2 敲除株（货号 SHA-KO-0600）适合作为回补实验的受体细胞，转入野生型 SETD2 表达载体后比较表型，有助于确认表型归因于 SETD2 缺失而非脱靶效应。
• 发货周期与运输方式？
  按平台公示的交期发货，冻存管以干冰、培养瓶以冰袋运输；具体时效受库存与目的地影响，请以下单信息为准。
• 如何判断与处理支原体污染？
  建议每 1–2 月用 PCR 法筛查支原体；一旦阳性应丢弃并彻底消毒超净台与培养箱，必要时以支原体清除试剂处理周边细胞，避免交叉传播影响实验。
• 是否有对照株？
  可提供空载体/野生型对照株或对应过表达/敲除配对株（见相关产品），便于设置实验对照。

十、相关产品推荐

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十一、产品质控与售后

关于 SETD2 基因敲除株（A375，货号 SHA-KO-0600）：敲除株附靶位点 PCR 扩增与 Sanger 测序验证说明（确认移码突变与敲除等位基因），随货技术资料载明鉴定方法与判读标准。产品科研专用；运输保温、收货复苏与售后时效按平台规则执行，具体疑问可联系售后咨询。