![质粒载体构建服务[HB-PL-SV]产品图](https://img1.dxycdn.com/p/s14/2026/0731/758/2599818696362213802.jpg)
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- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
汉恒生物
- 服务名称：
质粒构建
一、产品概述
汉恒生物（HanBio）定制质粒载体构建服务是面向科研用户提供的专业级基因克隆与载体工程解决方案。服务涵盖从基因序列获取、载体设计、克隆构建、质控验证到最终交付的完整流程，支持慢病毒、腺病毒、AAV等多种病毒载体系统，以及过表达、RNAi、CRISPR/Cas9、荧光素酶报告基因等多种功能载体类型的定制构建。
核心服务定位：
◆ 一站式载体构建服务：从序列获取到最终质粒交付，全流程无需用户动手操作
◆ 多载体系统全覆盖：慢病毒、腺病毒、AAV、常规质粒等四大载体体系
◆ 现货基因库支持：21,000+ 热门基因现货，快速响应常见构建需求
◆ 专业质控体系：测序验证+功能验证双重保障，确保构建质量
二、服务类型详解
2.1 基因合成与克隆服务
汉恒生物基因合成服务提供从短片段（< 500 bp）到长片段（> 3 kb）的基因合成能力，支持密码子优化、序列设计与克隆至指定载体。
|
服务项目 |
合成长度范围 |
交付规格 |
|
常规基因合成 |
≤ 3,000 bp |
5 μg 质粒 + 测序报告 |
|
长片段基因合成 |
3,000–10,000 bp |
5 μg 质粒 + 测序报告 |
|
密码子优化合成 |
≤ 3,000 bp |
5 μg 质粒 + 优化报告 |
|
基因片段合成 |
≤ 500 bp |
5 μg 质粒 |
|
基因突变/点突变 |
单点突变 |
5 μg 质粒 + 测序报告 |
|
多片段组装（Gibson） |
2–5 片段 |
5 μg 质粒 + 测序报告 |
2.2 过表达载体构建服务
过表达载体是基因功能研究中最基础的工具载体，汉恒生物提供覆盖慢病毒、腺病毒、AAV等系统的过表达载体构建服务。
|
载体系统 |
代表载体 |
启动子 |
荧光标记 |
抗性标记 |
|
慢病毒过表达 |
pHBLV-CMVIE-MCS-EGFP |
CMV |
EGFP/ZsGreen/mCherry |
AmpR |
|
腺病毒过表达 |
pHBAd-CMVIE-MCS |
CMV |
可选 EGFP |
AmpR |
|
AAV过表达 |
pHBAAV-CMVIE-MCS |
CMV |
可选荧光标记 |
AmpR |
|
常规质粒过表达 |
pCDH-CMV-MCS-EF1α-Puro |
CMV |
EGFP |
AmpR |
|
Tet-on诱导表达 |
pHBLV-TetOn-MCS |
CMV |
可选荧光标记 |
AmpR |
2.3 RNAi干扰载体构建服务
汉恒生物RNAi载体构建服务涵盖shRNA设计、慢病毒shRNA载体构建及稳定细胞系建立的全流程支持。根据官网和丁香通信息，汉恒提供专业的RNAi序列设计服务，确保干扰效率。
|
服务项目 |
载体类型 |
荧光标记 |
抗性标记 |
|
shRNA慢病毒载体 |
pHBLV-shRNA |
EGFP/mCherry |
AmpR |
|
shRNA腺病毒载体 |
pHBAD-shRNA |
EGFP |
AmpR |
|
miRNA模拟/抑制 |
pHBLV-pre-miR/miR-Zip |
可选荧光标记 |
AmpR |
|
多靶点shRNA |
pHBLV-shRNA-Multi |
可选荧光标记 |
AmpR |
2.4 CRISPR/Cas9载体构建服务
CRISPR/Cas9基因编辑载体构建是汉恒生物的高端定制服务之一，支持基因敲除、敲入、激活、抑制等多种编辑模式。
|
服务项目 |
载体类型 |
编辑模式 |
sgRNA设计 |
交付内容 |
|
CRISPR敲除载体 |
pHBLV-U6-sgRNA-Cas9 |
基因敲除 |
汉恒专业设计 |
质粒+sgRNA报告 |
|
CRISPR敲入载体 |
pHBLV-sgRNA-Cas9-Donor |
基因敲入 |
汉恒专业设计 |
质粒+Donor设计 |
|
CRISPR激活(CRISPRa) |
pHBLV-sgRNA-dCas9-VPR |
基因激活 |
汉恒专业设计 |
质粒+sgRNA报告 |
|
CRISPR抑制(CRISPRi) |
pHBLV-sgRNA-dCas9-KRAB |
基因抑制 |
汉恒专业设计 |
质粒+sgRNA报告 |
2.5 荧光素酶报告基因载体构建服务
汉恒生物提供专业的荧光素酶报告基因载体构建服务，用于启动子/增强子活性分析、转录因子靶基因验证、miRNA靶基因验证等研究场景。
|
服务项目 |
载体类型 |
应用场景 |
报告基因 |
交付内容 |
|
启动子活性分析 |
pGL3-Basic系列 |
启动子/增强子活性验证 |
Firefly Luc |
质粒+测序报告 |
|
转录因子验证 |
psiCHECK-2系列 |
转录因子靶基因验证 |
Renilla Luc |
质粒+测序报告 |
|
miRNA靶基因验证 |
psiCHECK-2系列 |
miRNA与靶基因互作验证 |
Renilla Luc |
质粒+测序报告 |
|
双荧光素酶检测服务 |
psiCHECK/pGL3 |
完整双报告基因检测 |
双Luc |
质粒+检测报告+数据 |
2.6 载体改造与定制服务
除上述标准服务类型外，汉恒生物还提供载体骨架改造、多基因共表达载体构建、融合蛋白载体构建等高端定制服务。
|
服务项目 |
说明 |
技术要点 |
|
启动子替换 |
替换载体原有启动子为指定启动子 |
需提供启动子序列或名称 |
|
抗性标记更换 |
更换载体抗生素筛选标记 |
AmpR→NeoR/PuroR等 |
|
荧光标记更换 |
更换报告基因荧光标记 |
EGFP→mCherry/ZsGreen等 |
|
多基因共表达载体 |
构建2–4个基因共表达载体 |
需设计多启动子/IRES/2A策略 |
|
融合蛋白载体 |
构建蛋白融合表达载体 |
需设计融合位点与标签 |
|
载体骨架改造 |
对现有载体骨架进行定制化改造 |
按用户需求定制 |
三、服务流程详解
汉恒生物定制质粒载体构建服务遵循标准化六步流程，确保每一步都有清晰的质控节点与交付标准。
|
步骤 |
环节名称 |
具体内容 |
质控要点 |
用户参与 |
|
Step 1 |
需求沟通与方案设计 |
了解用户研究目的、基因信息、载体偏好；设计载体构建方案 |
方案可行性评估 |
提供基因序列/UniProt号/参考文献 |
|
Step 2 |
序列获取与优化 |
获取目标基因序列；密码子优化（如需）；sgRNA/shRNA序列设计 |
序列准确性确认；优化评分≥ 90分 |
确认优化方案 |
|
Step 3 |
基因合成/克隆构建 |
基因合成或PCR扩增；酶切连接/Gibson组装；载体构建 |
克隆效率监控；阳性克隆筛选 |
无需动手操作 |
|
Step 4 |
测序验证 |
对构建产物进行Sanger测序；比对验证序列准确性 |
序列100%匹配目标序列 |
确认测序结果 |
|
Step 5 |
质粒制备与质检 |
大量制备质粒；浓度、纯度检测；内毒素检测（可选） |
浓度≥ 200 ng/μL；纯度A260/280=1.8–2.0 |
无需动手操作 |
|
Step 6 |
交付与售后支持 |
交付质粒+测序报告+载体图谱；提供后续实验建议 |
交付物完整性核对 |
签收确认 |
四、交付内容与规格标准
汉恒生物定制质粒载体构建服务的标准交付物包含以下内容：
|
交付物 |
规格/格式 |
说明 |
|
构建质粒 |
5 μg/管，干粉或溶液形式 |
浓度≥ 200 ng/μL；纯度A260/280=1.8–2.0 |
|
测序报告 |
PDF格式电子文件 |
Sanger测序结果，与目标序列100%比对 |
|
载体图谱 |
PDF格式电子文件 |
详细标注各功能元件位置与序列信息 |
|
基因序列信息 |
文本格式 |
目标基因序列、优化后序列、sgRNA/shRNA序列等 |
|
实验建议书 |
PDF格式 |
后续转染/包装/感染实验的建议方案 |
五、基因合成技术细节
5.1 密码子优化
汉恒生物基因合成服务支持针对不同表达系统的密码子优化，确保目标基因在宿主细胞中获得最高表达效率。
|
优化参数 |
说明 |
|
优化算法 |
基于宿主物种密码子使用频率表，最大化CAI（密码子适应指数） |
|
支持物种 |
人（Human）、小鼠（Mouse）、大鼠（Rat）、HEK293T等多种哺乳动物表达系统 |
|
优化目标 |
CAI ≥ 0.90；消除稀有密码子；避免串联稀有密码子区 |
|
GC含量调控 |
优化后GC含量控制在40%–60%区间，避免极端GC分布 |
|
序列稳定性 |
消除重复序列、二级结构位点、反向重复序列等不稳定因素 |
|
特殊限制 |
避免内部酶切位点冲突（根据用户指定载体MCS区域限制酶） |
5.2 基因突变与点突变服务
汉恒生物提供定点突变、截短突变、融合突变等多种突变构建服务，是蛋白功能结构域研究的常用工具。
|
突变类型 |
技术方法 |
适用场景 |
|
单点突变 |
定点突变PCR |
氨基酸替换、功能位点验证 |
|
多点突变 |
重叠延伸PCR |
多氨基酸同时替换 |
|
截短突变 |
PCR截短克隆 |
蛋白结构域缺失分析 |
|
融合突变 |
融合克隆构建 |
标签蛋白融合、功能域融合 |
|
插入突变 |
定点插入克隆 |
标签插入、功能域插入 |
六、核心应用场景
汉恒生物定制质粒载体构建服务的核心应用场景覆盖生命科学研究的六大方向：
|
应用方向 |
典型研究目的 |
推荐载体类型 |
代表载体 |
|
基因功能研究 |
过表达验证基因功能 |
慢病毒过表达载体 |
pHBLV-CMVIE-MCS-EGFP |
|
基因沉默研究 |
shRNA干扰验证基因必要性 |
慢病毒shRNA载体 |
pHBLV-shRNA-EGFP |
|
基因编辑研究 |
CRISPR敲除/敲入验证 |
CRISPR/Cas9载体 |
pHBLV-U6-sgRNA-Cas9-Puro |
|
转录调控研究 |
启动子/转录因子/miRNA靶验证 |
荧光素酶报告载体 |
psiCHECK-2 / pGL3-Basic |
|
蛋白结构域研究 |
截短/突变/融合分析功能域 |
突变载体/融合载体 |
pHBLV-CMVIE系列 |
|
可诱导表达研究 |
Tet-on系统控制表达时序 |
Tet-on诱导载体 |
pHBLV-TetOn-MCS-EGFP |
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