豚鼠血小板活化因子（PAF）ELISA检测试剂盒

豚鼠血小板活化因子（PAF）ELISA检测试剂盒

基础信息
产品规格：48T / 96T
检测方法：双抗体夹心法 ELISA
保存条件：2～8℃冷藏
有效期：6 个月

适用样本类型
豚鼠血清、血浆（EDTA / 肝素抗凝）
组织匀浆上清
细胞培养上清液
胸腔积液、腹水、灌洗液等生物体液
样本保存提示：分离上清后分装，-20℃/-80℃保存，避免反复冻融；出现沉淀必须再次离心。

试剂盒组分（96T 配置）
预包被微孔板（可拆卸板条）×1
PAF 标准品（冻干 / 液体）6 瓶，梯度：2400、1200、600、300、150、75、0 pg/mL
HRP 标记检测抗体 ×1 瓶
样本稀释液 ×1 瓶
20× 浓缩洗涤液 ×1 瓶
TMB 显色底物液 ×1 瓶
终止液（稀硫酸）×1 瓶
封板膜、自封袋、说明书各 1 份

实验原理
微孔板预先包被抗豚鼠 PAF 捕获抗体；加入标准品 / 待测样本，样本中 PAF 与固相抗体结合；再加入 HRP 标记抗 PAF 检测抗体，形成固相抗体 - PAF - 酶标抗体三明治复合物。充分洗涤后加入 TMB 底物显色，HRP 催化底物生成蓝色；加终止液变为黄色。
450nm 测定 OD 值，吸光度与样本 PAF 浓度呈正相关，通过标准曲线计算浓度。

操作流程
试剂盒室温平衡 20 min，配制洗涤液；取出所需板条
设空白孔、标准品孔、待测样本孔
标准品孔：50 μL 梯度标准品
样本孔：10 μL 样本 + 40 μL 样本稀释液
每孔加入 HRP 酶标抗体 100 μL，封板，37℃孵育 60 min
洗板 5 次，拍干
加入 TMB 底物 100 μL，37℃避光显色 10～15 min
加入终止液 50 μL，混匀
5 min 内酶标仪 450nm 读取 OD 值，拟合标准曲线计算浓度
总实验时长：约 90～110 min

注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。