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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海抚生
- 库存:
20
- 灵敏度:
31.25pg/mL
- 样本:
血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本
- 标记物:
血清/血浆
- 适应物种:
大鼠、小鼠、人、植物
- 应用:
ELISA试剂盒
- 检测方法:
ELISA法
- 检测范围:
62.5pg/mL-4000pg/mL
- 规格:
48T/96T
| 规格: | 48T | 产品价格: | ¥1500.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 96T | 产品价格: | ¥2200.0 |
通过特异性抗人PSMb4单克隆抗体包被于微孔板,与样本中的PSMb4结合形成固相抗体复合物。加入HRP标记的检测抗体后,形成抗体-抗原-酶标抗体三明治结构。经洗涤去除未结合物质,加入TMB底物显色,HRP催化TMB转化为蓝色,酸性终止液使颜色变为黄色。颜色深浅与PSMb4含量成正比,酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品浓度。
性能参数:
产品名称:人蛋白酶体亚基β4(PSMb4)ELISA试剂盒
英文名称:Human PSMb4 ELISA Kit
产品规格:48T/96T
检测样本:血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本。
检测范围:62.5pg/mL-4000pg/mL
灵敏度:31.25pg/mL
特异性:与人其他细胞因子无交叉反应。
有效期:6个月(2-8℃保存)。
检测流程:
1、固相抗体包被
微孔板预先包被一种高特异性的单克隆抗体(捕获抗体),该抗体能专一识别并结合人蛋白酶体亚基β4(PSMb4)中的特定表位。
2、样本加入与抗原结合
将待测样本(如血清、血浆或细胞培养上清)加入微孔中,样本中的PSMb4会与包被抗体结合,形成“固相抗体-抗原”复合物。未结合的成分在后续洗涤步骤中被清除。
3、酶标二抗结合
加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的第二抗体(检测抗体),该抗体识别PSMb4的另一个独立表位,从而形成“捕获抗体-PSMb4-检测抗体”的三明治结构。
4、显色反应
洗涤去除未结合的酶标抗体后,加入TMB底物溶液。HRP催化TMB产生蓝色产物,在酸性终止液(如硫酸)作用下变为黄色。
5、定量分析
使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),颜色深浅与样本中PSMb4浓度呈正相关。
数据及参考曲线:
| 校准品浓度(pg/mL) | 4000.00 | 2000.00 | 1000.00 | 500.00 | 250.00 | 125.00 | 62.50 | 0.00 |
| OD450/630值 | 2.722 | 1.596 | 0.874 | 0.498 | 0.311 | 0.163 | 0.091 | 0.046 |
| 校正OD值 | 2.676 | 1.550 | 0.828 | 0.452 | 0.265 | 0.118 | 0.045 | 0.000 |

1. 试剂准备
将试剂盒所有组分平衡至室温(20–25℃,≥30min);浓缩洗涤液按 1:19 稀释配制工作液。
标准品用标准品稀释液复溶,梯度稀释,配置系列浓度梯度标准溶液,备用。
2. 实验流程
加样:设置空白孔、标准孔、样本孔,每孔加入 100 μL 对应标准品 / 待测样本,封板,37℃恒温孵育 90 min。
洗涤:弃净孔内液体,每孔加满洗涤工作液,静置 30 s,甩干拍净,重复洗涤 5 次。
加酶结合物:每孔加入 100 μL HRP 标记检测抗体,封板混匀,37℃孵育 60 min。
洗涤:重复上述洗涤步骤 5 次,彻底拍干微孔。
显色:每孔避光加入 90 μL TMB 底物显色液,轻柔混匀,37℃避光显色 15 min。
终止:按同等顺序每孔快速加入 50 μL 终止液,轻晃混匀,溶液由蓝转黄。
读数:15 min 内,酶标仪 450 nm 波长测定各孔 OD 值,拟合标准曲线计算样本含量。
3. 关键质控要点
全程孵育使用专用封板膜,防止液体蒸发、交叉污染。
洗涤充分为实验核心,残留洗液易造成背景偏高、假阳性。
TMB 显色液避光储存,现用现加,严禁接触氧化剂。
加终止液顺序需与显色加样一致,避免局部色差、绿色残留。
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文献和实验特异性使免疫测定能在一非常复杂的蛋白质化合物(例如血清)中测定某一特定的物质,而不需先分离待检物。 但是这种特异性也不是绝对的。假使两种化合物有着部分相同的结构,在抗原抗体反应中可出现交叉反应。例如:绒毛膜促性腺激素(hCG)和黄体生成激素(LH)均由 α 和 β 两个亚单位组成,其结构的不同处在 β 亚单位,而两者的 α 亚单位是同类的。用 hCG 免疫动物所得的抗血清中含有抗 α-hCG 和抗 β-hCG两种抗体,抗 α-hCG 抗体将与LH中的 α 酶位发生交叉反应。在临床检验中,如用抗 hCG
上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 2. ELISA的类型 ELISA可用于测定抗原 ,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂:(1)固相的抗菌素原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent);(2)酶标记的抗原或抗体,称为"结合
关系,所以抗原抗体反应具有高度的特异性。例如乙肝病毒中的表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)和核心抗体(HBcAg),虽来源于同一病毒,但仅与其相应的抗体结合,而不与另外两种抗体反应。抗原抗体反应的这种特异性使免疫测定能在一非常复杂的蛋白质化合物(例如血清)中测定某一特定的物质,而不需先分离待检物。 但是这种特异性也不是绝对的。假使两种化合物有着部分相同的结构,在抗原抗体反应中可出现交叉反应。例如:绒毛膜促性腺激素(hCG)和黄体生成激素(LH)均由α和β两个亚单位组成,其结构的不同
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