猪（Porcine）抗胶原蛋白抗体(CLA)ELISA检测试

猪（Porcine）抗胶原蛋白抗体(CLA)ELISA检测试剂盒 

产品货号：DM-P5525

产品规格：48/96T

上海笃玛生物坚持技术为本、品质先行。试剂盒依托经典酶联免疫吸附实验原理搭建体系，持续优化抗体配对与反应缓冲体系，降低非特异性干扰；企业恪守标准化生产与多重出厂检测原则，兼顾技术创新与实验实用性，持续为高校实验室、科研平台提供可靠的蛋白定量检测工具。

 

ELISA 利用抗原与抗体特异性结合的免疫学原理，结合酶的高效催化显色反应，根据颜色深浅实现目标蛋白定量检测。

 

ELISA试剂盒的四da原理

 

试剂盒的组成：

 

ELISA 试剂盒标准操作流程（双抗体夹心法为例）

双抗体夹心法需要一对配对抗体：捕获抗体、检测抗体，两种抗体识别靶抗原上两个不同抗原表位。微孔板预先固定捕获抗体，先结合样本中的目标抗原，再结合检测抗体，形成 “夹心” 免疫复合物；借助生物素 - 链霉亲和素系统标记 HRP 酶，催化 TMB 显色，最终实现抗原定量。

样本前处理：

收集细胞培养液，转移至离心管；

3000rpm离心10min，去除细胞及碎片；

吸取上清进行检测；若不能立即实验，分装冻存于-20℃；

避免反复冻融；上清出现沉淀，检测前再次离心取上清

加样与孵育

加样是按照实验排布依次向微孔板加入标准品与待测样本，保证加样速度、体积统一，减少操作误差，孵育过程为抗原与固相捕获抗体提供适宜温度与充足反应时间，促进二者发生特异性结合，孵育环境保持稳定，避免液体蒸发影响体系浓度，反应结束后通过洗板去除未结合的游离物质，减少非特异性吸附，为后续免疫反应奠定基础。

 

洗板（核心关键步骤）

洗板是利用洗涤液冲洗微孔，去除孔内未结合的游离抗原、多余抗体以及各类杂质，减少非特异性吸附从而降低背景值，每一轮孵育结束后均需要洗板，常规操作洗板 5 次，每次加入洗涤液充分浸润 30 秒左右，甩干并在吸水纸上拍干，避免残留洗涤液稀释后续反应试剂，全程保持操作一致性，严格把控洗板次数与浸泡时间，最da程度减少干扰物质，保障显色结果真实可靠。

加酶结合物与二次孵育

向微孔板加入 HRP 标记链霉亲和素，链霉亲和素能够与免疫复合物上的生物素特异性结合，使标记酶富集在夹心复合物上完成信号标记，二次孵育提供适宜温度与充足反应时间，促进二者充分结合，孵育完成后充分洗板去除未结合的游离酶结合物，防止多余酶造成背景升高，保证后续显色强度和靶抗原浓度呈良好对应关系。

二次洗板

二次洗板是酶结合物孵育结束后的关键净化步骤，主要用于彻底洗脱微孔内未成功结合生物素的游离 HRP 酶标试剂、残留杂蛋白与反应体系杂质，杜绝游离酶残留引发的非特异性底物催化反应，有效降低实验背景干扰、规避假阳性结果。规范操作下全程洗涤 5 次，每次加入洗涤液充分浸润孔底与孔壁 30 秒，使残留杂质充分溶解洗脱，随后彻底弃液、吸水纸拍干孔内残留液体，避免稀释后续底物试剂、破坏反应体系平衡，精准保障后续显色强度仅与特异性结合的夹心免疫复合物数量成正比，da幅提升 ELISA 检测的精准度与重复性。

底物显色

向微孔内加入 TMB 底物溶液，在适宜温度条件下避光开展反应，固定在免疫复合物上的 HRP 能够催化底物发生氧化反应并呈现蓝色，样本内靶抗原含量越高，结合的酶分子数量越多，显色就越深；需要统一控制显色时长，防止显色不足或者过度饱和影响线性关系，整个过程避光操作，避免底物自发氧化产生本底颜色干扰实验结果，显色完成后及时加入终止液结束酶促反应。

终止反应与读数

加入终止液可以快速改变反应体系酸碱度，直接抑制 HRP 酶活性，立刻终止酶促显色反应，孔内蓝色产物随之转变为稳定的黄色，保证各孔显色程度不再发生变化，消除因显色时长差异带来的误差；终止完成后需在规定时间内使用酶标仪检测吸光度，选择 450nm 为主检测波长，可搭配 630nm 参考波长校正孔板背景与光学干扰，读取的 OD 值将用于构建标准曲线，进而换算出样本中靶抗原浓度。

数据处理

先整理所有孔的 OD 数值，剔除复孔中偏差过da的异常数据，计算各组复孔平均 OD 值，扣除空白孔 OD 值得到校正后吸光度；以标准品浓度为横坐标、对应的校正 OD 值为纵坐标，采用四参数 Logistic 模型拟合标准曲线；将样本校正 OD 值代入曲线公式，算出稀释后样本浓度，再乘以样本预先设置的稀释倍数，最终得到原始样本中靶抗原真实浓度，同时结合曲线相关系数判断本次实验数据是否有效。

ELISA试剂盒核心性能评价指标

1.灵敏度（最低检测限）：试剂盒能够稳定检出的最低抗原浓度，数值越低代表试剂盒检测微量样本的能力越强。

2.线性范围：检测信号与抗原浓度保持良好线性对应的浓度区间，区间越宽，可直接检测的样本浓度范围越da，减少多次稀释操作。

3.准确度（回收率）：通过加标回收试验验证，实测浓度和理论浓度的吻合程度，反映检测结果贴近真实值的水平。

4.精密度：分为板内精密度与板间精密度，用变异系数 CV 表示，体现同一标本多次检测结果的重复性，变异系数越小，实验稳定性越好。

5.特异性：评估试剂盒与同源类似物质发生交叉反应的程度，交叉反应越低，越不容易出现假阳性。

6.稳定性：包含储存稳定性、开瓶稳定性、热加速稳定性，考察试剂在规定储存条件下性能维持不变的时长。

7.平行性：高浓度样本梯度稀释后，稀释样本曲线与标准曲线趋势保持一致，证明样本基质不会明显干扰检测。

 

结果计算

汇总各组标准品与待测样本的吸光度数据，剔除复孔中偏差较da的异常数值并计算平均 OD 值，扣除空白孔吸光度得到校正 OD 值，以标准品浓度为横坐标、校正 OD 值为纵坐标采用四参数 Logistic 模型拟合标准曲线并检验拟合相关系数，随后将待测样本校正 OD 值代入曲线方程反算出稀释后浓度，再乘以实验设置的样本稀释倍数得到原始样本中待测物真实浓度，若样本计算浓度超出标准曲线有效检测区间，则需要调整稀释比例重新检测以保障结果可靠。

（图片仅供参考）

售后服务

上海笃玛生物科技有限公司拥有专业的技术服务团队，为您提供全程技术支持。如您在产品使用过程中有任何疑问，或对产品质量有异议，请及时联系我们的技术顾问，我们将在24小时内响应，为您提供实验方案优化、问题排查等专业服务。

企业介绍：

上海笃玛生物科技有限公司是一家从事生物学试剂及试剂盒的高科技生物企业总部位于上海，并在全国设有经销或代理机构。产品因可靠而稳定的质量和较为完善的售后服务确立了“笃玛生物”良好的品牌形象。公司秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念，拥有专业的研发和质量检测团队以及先进的仓储和物流系统。“笃玛生物”已经得到全国科研工作者的认可。

公司拥有一批专业的研发人员，我们专注于生物产品的不断完善和创新。产品覆盖面广，品质可靠。先后开发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的多种试剂及试剂盒。同时，提供各种常规生化试剂，库存常备产品多达10000多种，可随时为广da科研工作者提供各类专业试剂。在质量方面，谨记公司信念：质量高于一切。所有研发的产品都设有严谨的生产流程，科学的质量检测方法和成熟的质量检测程序，我们恪守对每一位用户的承诺：用专业的态度做专业的品牌。同时，公司组建了一支专业的技术服务队伍，能够为科研工作者提供专业的技术服务。每一位购买笃玛生物产品的用户都能够得到专业的咨询和完善的售后服务。