油菜内源基因HMGI/Y核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

油菜内源基因HMGI/Y核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

产品概述
产品名称：油菜内源基因HMGI/Y核酸检测试剂盒(荧光PCR法)
英文名称：Canola Seed Endogenous HMG I/Y Gene Probe Realtime PCR Kit
用途：专用于油菜内源 HMG I/Y 基因的定性 / 定量检测，适用于油菜种子、叶片、饲料等样本，主要用于科研及转基因检测内参对照

规格与组分
组分    规格    描述
2×Probe qPCR Master Mix    500μL    含缓冲液、热启动 Taq 酶、dNTPs、Mg²⁺
HMG I/Y 引物 - 探针冻干粉    50T    靶标特异性引物与荧光探针（FAM）
阳性对照（质粒）    0.5mL    1×10⁷拷贝 /μL，无感染性
无酶水    1mL    稀释与体系配制
说明书    1 份    操作指南

技术原理
基于实时荧光定量 PCR（TaqMan 探针法）：
引物与探针结合 HMG I/Y 保守区；
扩增时 Taq 酶 5'→3' 外切酶活性切割探针，释放FAM 荧光；
仪器实时监测荧光，Ct 值与模板浓度负相关，实现定性 / 定量。

样本要求
样本类型：油菜种子、叶片、幼苗、饲料、加工品等；
核酸提取：柱式 / 磁珠法提取基因组 DNA，OD260/280=1.8–2.0，浓度≥10ng/μL；
保存运输：样本 - 20℃保存，避免反复冻融；试剂盒-20℃避光保存，有效期12 个月。

操作流程
试剂配制（冰上）：
2×Master Mix：10μL
引物 - 探针混合物：1μL
无酶水：7μL
DNA 模板：2μL（阳性对照 / 阴性对照同步设置）
PCR 扩增（两步法）：
预变性：95℃，3min；
循环（40 次）：95℃ 15s → 60℃ 1min（收集 FAM 荧光）；
结果判读：
阳性：Ct＜40，典型 S 型扩增曲线；
阴性：Ct≥40或无扩增；
可疑：36≤Ct＜40，需重复验证。

质量控制
阳性对照：Ct≤30，S 型曲线；
阴性对照：无扩增或 Ct≥40；
实验无效：阳性对照阴性或阴性对照阳性，需排查污染或试剂问题。

注意事项
仅用于科研用途，不用于临床诊断；
分区操作（样本处理 / 试剂配制 / 扩增），防交叉污染；
试剂避光保存，避免强光照射；
吸头、离心管均用无酶无菌耗材。