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免疫电镜 单标双标 共定位检测 实验服务

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  • 可应用于蛋白在亚细胞水平的定位,如想观察某种蛋白在线粒体、内质网、细胞核等细胞器上的表达情况或胞内分布情况,会以胶体金--黑色颗粒分布的形式呈现在电镜图片中
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  • 2026年07月08日
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      上海经科化学科技有限公司

    • 服务名称

      免疫电镜 双标全套 共定位检测电镜实验服务

    • 规格

    一、服务简介

    本服务仅可用于科研,不可用于临床诊断。整套一站式包含免疫电镜包埋、超薄镍网切片、双标免疫标记、透射电镜拍摄全流程,无需分段单独送检;同时提供单项拆分服务可选:免疫电镜包埋、超薄切片 (镍网)、免疫电镜单标标记、免疫电镜双标标记、透射电镜拍照、抗体配套使用。
     
    依托抗原 - 抗体特异性结合原理,在同一张镍网切片上同时标记两种目标蛋白,采用 4nm、12nm 两种不同粒径胶体金二抗区分两种抗原信号,电镜下呈现不同尺寸黑色颗粒,可直观解析两种蛋白在线粒体、内质网、细胞核等细胞器中的亚细胞分布与空间共存关系。双标实验要求两种一抗分属不同种属,配套山羊抗小鼠、山羊抗大鼠、山羊抗兔胶体金二抗;若使用其他种属一抗,需自行匹配对应胶体金二抗。整体实验周期约一个月。

    二、完整标准化实验流程

    1. 组织规范取材,投入免疫电镜专用固定液低温固定;
    2. 低温脱水、梯度树脂渗透、低温紫外聚合完成包埋;
    3. 制备 70–80nm 超薄切片并捞至镀膜镍网;
    4. 双种一抗、两种粒径金标二抗完整孵育标记,完成铀复染烘干;
    5. 透射电镜上机采集成像原图。

    三、样本取材与储运规范

    1. 离体后 1–3 分钟内完成取样,组织块尺寸严格控制 1mm³,尺寸小于常规透射电镜样本;提前备好装有免疫电镜固定液的培养皿,离体组织立即投入液体中切割分块,再转入盛有新鲜固定液的容器;
    2. 精准截取目标观测区域,观察肾小球取肾皮质、观察胰岛取胰尾;皮肤、肠道等易卷曲组织可粘贴滤纸后再固定;
    3. 全程使用锋利刀片,规避镊子挤压、拉扯造成组织机械挫伤;
    4. 样本 4℃冰袋储运,全程禁止固定液冷冻结冰;固定完成后尽快开展后续实验,减少抗原流失影响标记效果。

    四、抗体相关说明

    可自备实验一抗;市面多数抗体未经过免疫电镜适用性验证,标记效果存在不确定性。如需配套一抗,按对应使用规范执行。

    五、交付成果

    1. 完成双蛋白胶体金标记、铀复染处理的镍网切片;
    2. 透射电镜原始成像图,画面中依靠 4nm、12nm 两种胶体金颗粒区分两类蛋白表达位置;
    3. 如需对图片内细胞器、蛋白信号做文字标注与定量统计,可搭配图像分析配套服务。

    六、适用科研场景

    适用于肾脏、心肌、肝脏、各类细胞等样本的双蛋白共定位研究,一站式完成全部制样、标记、拍摄操作,输出可直接用于学术论文的共定位电镜图像,支撑蛋白互作、细胞器功能、组织病理相关机制研究。
     
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    • 免疫荧光单标检测

      免疫荧光实验步骤 脱蜡至水 二甲苯Ⅰ(8min) 二甲苯Ⅱ(8min) 无水乙醇和二甲苯1:1(5min) 无水乙醇(3min) 95%乙醇(3min) 85%乙醇(3min) 75%乙醇(3min) PBS洗3遍 二.抗原修复 柠檬酸钠抗原修复液修复。 抗原修复100℃  20min  ;自然冷却至室温。 三.PBST洗2遍,PBS洗1遍。每次5min。 四.用30%H2O2和甲醇配制3%的H2O2溶液。每张切片加1滴,室温下孵育10分钟,以阻断内源性过氧

    • 如何让ABI测序仪更好地为实验服务

      8. 将毛细管固定于检测窗口holder处,注意毛细管窗口之清洁(可用无水乙醇清洗), 毛细管窗口应与机器检测窗口位置的吻合(此点可用毛细管上的Marker位于检测窗边缘来证实)。 9. 毛细管另一端插入电极端,使尖端比电极略低约0.5mm,同时用手指轻轻左右调节毛细管,使之尖端贴近电极尖端(间隔约2毫米),调好后用胶带固定,合上控温板门。 10. 在Instrument 菜单下执行Autosampler Calibration 命令, 出现Autosampler

    • 影响免疫电镜的因素

      1.标记物 用于电镜观察的标记物有三类:一类是电子密度致密的标记物,如铁蛋白、辣根过氧化物酶等。另一类则是放射性同位素,如135 I、35 S、32 P、14 C、3 H等,第三类则是有独特形状的标记物,如血兰蛋白、噬菌体等。 对标记物的要求是:具有特定的形状、不影响抗原抗体复合物的特性与形状。目前用于免疫电镜的标记物主要是铁蛋白和HRP。两者各有其优点,铁蛋白电子密度致密。观察时反差大,优于酶标记,但铁蛋白分子量大(460 000),穿透能力差,所以适于细胞

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