牛流行热病毒(BEFV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

牛流行热病毒(BEFV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

产品概述
产品名称：牛流行热病毒（BEFV）核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）
英文名称：Bovine Ephemeral Fever Virus RNA Detection Kit(Real-Time PCR Method)
包装规格：50T / 盒
预期用途：用于检测牛全血、血清、鼻拭子、组织等样本中的牛流行热病毒 RNA，适用于牛流行热的辅助诊断、流行病学调查与疫情监测。仅用于科研，不用于临床诊断。

检测原理
本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，设计一对牛流行热病毒特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光 PCR 技术对牛流行热病毒的 RNA 进行体外扩增检测，用于科研实验中对可疑感染者的病原学检测。

试剂盒组分
包装规格    50T/盒
BEFV 反应液    500μL×2 管
酶液    50μL×1 管
BEFV 阳性质控品    50μL ×1 管
阴性质控品    250μL ×1 管

性能指标
特异性：100% 特异性，不与牛病毒性腹泻病毒、蓝舌病病毒、口蹄疫病毒、水泡性口炎病毒等牛源病毒交叉反应。
重复性：批内 CV＜1.0%，批间 CV＜2.0%，结果稳定。
线性范围：10²–10⁷拷贝 /μL，标准曲线 R²≥0.995。
检出时间：感染后1 天可检出，持续至7–8 天。

样本要求
样本类型：全血（EDTA 抗凝）、血清、鼻拭子、咽喉拭子、肺 / 脾 / 淋巴结等组织。
样本保存：
新鲜样本：2–8℃≤24 小时；
长期保存：-20℃或 - 80℃，避免反复冻融（≤5 次）。
核酸提取：使用专用 RNA 提取试剂盒，OD260/280=1.8–2.1，无蛋白 / 杂质污染。

操作流程（25 μL 体系）
试剂准备（冰上操作）：
反应液：20 μL / 人份；
模板 RNA：5 μL（阳性 / 阴性对照各加 5 μL）；
体系：20 μL 反应液 + 5 μL 模板，瞬时离心。
PCR 扩增程序（主流仪器：ABI 7500、Bio-Rad CFX96）：
逆转录：42℃，15 min；
预变性：95℃，3 min；
循环（40 次）：95℃ 15 s → 55℃ 30 s（荧光采集）→ 72℃ 15 s；
溶解曲线（染料法）：95℃ 15 s → 60℃ 1 min → 95℃ 15 s。
结果判读：
阳性：检测通道 Ct 值≤40，且曲线有明显的指数增长曲线；
阴性：样本检测结果 Ct 值>40 或无 Ct 值。

保存与有效期
保存条件：-20℃±5℃避光保存，运输用干冰 / 冰袋。
有效期：12 个月（未开封）；开封后1 个月内用完，避免污染。

注意事项
所有操作严格按照说明书进行；
试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
反应液应避光保存；
反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

产品特点
高灵敏特异：保守区设计，最低 1 拷贝检出，无交叉反应。
快速便捷：一步法 RT-PCR，闭管操作，2.5 小时出结果。
即开即用：预混液含全部酶与引物探针，仅需加模板。
适用广泛：适配多种样本与主流荧光 PCR 仪，适合大规模筛查。