爬行动物腺病毒（RADV）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）

爬行动物腺病毒（RADV）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）

预期用途
定性 / 定量检测爬行动物（蜥蜴、蛇、龟鳖、鳄鱼等）样本中的腺病毒（RADV）核酸（DNA）

检测原理
实时荧光定量 PCR（TaqMan 探针法）
靶标：针对 RADV 基因组高度保守区（如六邻体蛋白基因、DNA 聚合酶基因）设计特异性引物 + 荧光探针。
荧光标记：探针 5’端标记FAM/HEX等报告荧光，3’端标记淬灭荧光；扩增时探针被 Taq 酶切割，报告荧光与淬灭荧光分离，荧光信号随扩增指数增长。
内参：含内源性对照（IC），监控核酸提取与扩增抑制，避免假阴性。

试剂盒组成
组分    规格    备注
PCR 扩增预混液（含引物 + 探针 + 酶 + dNTP + 缓冲液）    48/96 管    避光，-20℃保存
阴性对照（无酶水）    1 管    无 RADV 核酸
阳性对照（RADV 质粒 / 灭活病毒）    1 管    含已知浓度 RADV 核酸
内对照（IC）    1 管    监控抑制
说明书    1 份    含操作与判读标准

样本要求
适用样本：血液、血清、粪便、呼吸道分泌物、组织（肝 / 肾 / 脾）、拭子（口腔 / 泄殖腔）。
采集与保存：
新鲜样本 2–8℃≤24h；-20℃≤3 个月；-80℃长期保存，避免反复冻融（≤5 次）。
粪便 / 组织需匀浆处理后提取核酸。

检测流程（全程约 2.5–3h）
核酸提取：样本处理区提取 DNA。
试剂准备：4℃融化预混液，按样本数 + 2（阴 / 阳对照）分装，每管 23μL。
加样：各管加2μL 模板 DNA（阴性对照加无酶水，阳性对照加阳性模板）。
PCR 扩增：
94℃预变性 2min；
94℃ 30s → 57℃ 30s → 72℃ 30s，40 个循环；
72℃终延伸 5min。
结果判读：荧光 PCR 仪实时监测，FAM 通道读数。

性能指标
灵敏度（LOD）：10¹–10² copies / 反应（≈80 copies/mL），可检出微量感染。
特异性：100%，与其他爬行动物病毒（如疱疹病毒、虹彩病毒）、细菌无交叉反应。
线性范围：10¹–10⁷ copies / 反应，定量准确。
重复性：批内 / 批间 CV＜2%，结果稳定。

结果判读标准
阳性：Ct≤36，典型 S 型扩增曲线。
可疑：36＜Ct≤40，建议复检或测序确认。
阴性：Ct＞40或无扩增曲线；内对照必须阳性，否则结果无效。

储存与有效期
储存：-20℃±5℃避光，避免反复冻融；开封后 **-20℃** 可存至有效期。
有效期：12 个月（未开封）。
运输：干冰 / 冰袋低温运输，≤4 天不影响性能。

适用仪器
实时荧光 PCR 仪：ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche LightCycler 480、Applied Biosystems QuantStudio等。

主要特点
广谱：覆盖蜥蜴、蛇、龟鳖、鳄鱼等所有主流 RADV 基因型。
快速：全程≤3h，比病毒培养快5–7 天。
精准：内参质控，杜绝假阴性。
便捷：预混液设计，操作简单，减少污染风险。