禽流感病毒N2亚型(AIV-N2)核酸检测试剂盒(荧光PCR

禽流感病毒N2亚型(AIV-N2)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

产品概述
产品名称：禽流感病毒 N2 亚型（AIV-N2）核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）
检测原理：采用TaqMan 探针法实时荧光 RT-PCR，针对 AIV-N2 亚型NA 基因保守区设计特异性引物与 FAM 标记探针，一步法完成反转录与扩增，实时监测荧光信号，实现定性检测。
适用范围：禽类咽喉 / 泄殖腔拭子、组织匀浆、血清等样本中 AIV-N2 病毒 RNA 检测，用于辅助检测、流行病学调查与疫情监测。
产品规格：50T / 盒（50 次反应）
储存条件：-20℃避光，避免反复冻融；有效期12 个月
用途：仅供科研 ，不可用于人类临床试剂盒

组分（50T）
组分    规格    备注
RT-PCR 反应液（含引物、探针、酶、dNTP、缓冲液）    1.25mL（25μL / 反应）    FAM 通道检测 AIV-N2
阳性对照（AIV-N2 RNA）    50μL    Ct≤35，S 型扩增曲线
阴性对照（无酶水）    50μL    无扩增曲线
内标（可选，监控提取 / 扩增抑制）    50μL    HEX/VIC 通道

样本要求与处理
样本类型：禽类咽喉拭子、泄殖腔拭子、肺 / 气管组织、血清 / 血浆。
采样与保存：拭子浸入无菌 PBS，2–8℃≤24h，-20℃≤3 个月；组织样本 **-20℃** 保存。
核酸提取：用 RNA 提取试剂盒，提取后 RNA**-20℃** 保存，避免 RNase 污染。

检测流程（25μL 体系）
试剂准备：解冻后瞬时离心，冰上配制反应液（20μL / 反应）。
加样：每孔加5μL 模板 RNA（样本 / 对照），终体积25μL，封膜离心。
扩增程序（实时荧光 PCR 仪）：
反转录：42℃ 10min
预变性：95℃ 3min
循环（40 次）：95℃ 5s → 55℃ 40s（FAM 采集信号）
仪器兼容：ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche LightCycler、Agilent MX3000P 等。

结果判读（阈值自动 / 手动设定）
阳性：Ct≤35，且扩增曲线呈典型 S 型。
可疑：35＜Ct＜38，建议重复检测；重复后Ct＜38判阳性，≥38判阴性。
阴性：Ct≥38或无扩增曲线。
质控标准：阳性对照Ct≤35、阴性对照无扩增，实验有效。

性能指标
灵敏度：最低检出限100 拷贝 / 反应。
特异性：与 H5、H7、H9 亚型禽流感、新城疫、传染性支气管炎等无交叉反应。
重复性：批内 / 批间Ct 变异系数≤2%。
检测时长：含核酸提取 **≤1.5h**，纯扩增 **≤50min**。

注意事项
分区操作：严格区分试剂准备、样本处理、扩增检测区，防止交叉污染。
防污染：使用无 RNase/DNase 耗材，戴手套、口罩；阳性对照最后加样。
结果关联：阴性结果不排除病毒含量低于检出限或样本保存不当；需结合临床症状、流行病学综合判断。