禽传染性支气管炎病毒(AIBV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法

禽传染性支气管炎病毒(AIBV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

产品基本信息
通用名称：禽传染性支气管炎病毒（AIBV）核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）
英文名称：Avian Infectious Bronchitis Virus (AIBV) Nucleic Acid Detection Kit (Real-time PCR)
包装规格：50T / 盒
保存条件：-20℃避光，避免反复冻融；有效期12–15 个月
适用样本：鸡气管拭子、气管 / 肺组织、肾脏、输卵管、粪便、喉头等
适用仪器：ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

预期用途
用于定性检测禽样本中 AIBV（IBV）RNA，辅助诊断鸡传染性支气管炎，适用于养殖现场、疫病监测与实验室确诊。可检出常见Mass、QX、4/91等血清型。

检验原理
采用一步法 RT‑PCR：针对 AIBV 基因组高度保守区（如 S1 或 N 基因）设计特异性引物与FAM 标记荧光探针；RNA 逆转录为 cDNA 并同步扩增，扩增时探针结合模板并释放荧光；仪器实时监测荧光强度，Ct 值与病毒载量负相关，实现定性判定。

试剂盒组成
RT‑PCR 反应液：1.0 mL × 1 管（含引物、探针、dNTP、缓冲液）
酶混合液：50 μL × 1 管（逆转录酶 + Taq 酶）
AIBV 阳性对照：100 μL × 1 管（灭活病毒 RNA）
阴性对照：100 μL × 1 管（无酶水）
说明书：1 份

操作流程（25 μL 体系）
试剂配制：反应液 17.5 μL + 酶液 2.5 μL，混匀后分装 20 μL / 管
加样：各管加5 μL 模板 RNA / 对照
扩增程序：
50℃ 15 min（逆转录）
95℃ 2 min（预变性）
95℃ 15 sec → 60℃ 30 sec（45 个循环，60℃收集 FAM 荧光）
结果判定：
阳性：Ct ≤ 36，扩增曲线呈典型指数增长
可疑：36 ＜ Ct ≤ 40，建议重复检测
阴性：Ct ＞ 40 或无 Ct 值、无扩增曲线
质控标准：阳性对照 Ct ≤ 32；阴性对照无扩增

性能指标
最低检出限（LOD）：10³ copies/mL（约 10 copies/μL）
特异性：与新城疫、禽流感、传染性法氏囊病等无交叉反应
重复性：批内 / 批间CV ≤ 3%
灵敏度：可检出低至 10 copies/μL的病毒核酸

特点与优势
快速高效：全程约1.5 小时，一步法 RT‑PCR 减少操作、降低污染
高灵敏特异：保守区引物探针，检出限低、特异性强
操作简便：即开即用，配套完整对照，结果直观易判
适用广泛：适配多种样本与荧光 PCR 仪，适合大规模筛查

注意事项
分区操作：严格分试剂准备、样本处理、扩增 / 产物分析三区，防交叉污染
RNA 保护：样本采集后24 小时内冷藏（4℃）或-80℃冷冻，避免 RNA 降解
防污染：使用一次性耗材，移液器带滤芯，操作时避免气溶胶
结果参考：仅供辅助诊断，不单独作为确诊依据