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- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
PCR Fragment Recovery Kit (Column Method)
- 库存:
现货
- 供应商:
上海圻明
- 规格:
50 T
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文献和实验原理】 1.DNA片段回收方法:DNA片段在适当浓度的琼脂糖凝胶中,通上一定电压进行电泳,不同大小的DNA分子由于迁移率的不同而分离开。切下带有所需DNA片段的凝胶,用冻融法、玻璃奶回收法或商品化胶回收试剂盒将目的片段回收纯化。 2.利用Taq酶能够在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的A,而T载体是一种带有3’T突出端的载体,在连接酶作用下,可以把PCR产物插入到质粒载体的多克隆位点,可用于PCR产物的克隆和测序。
江janice 求助:用的是天根 的胶回收试剂盒,11管PCR产物,差不多500微升的总体积,上四个孔电泳,电泳后用天根的盒子回收到四个EP管,每管40微升,取5微升电泳,居然没有成功,又取10微升电泳还是没有任何条带,不知道可否有人用天根的盒子,是否遇到这方面的问题,一般100微升的PCR产物,回收到多少体积比较恰当,纠结啊,回收了好几次电泳都没有目的条带,盒子是刚买的新盒子,谢谢好心人帮助 大鹏鸟 天根的盒子还是很好
检测时都可能检测到一些非目标条带。可以通过电泳检测酶切之前的质粒判断质粒的质量,排除可能的原因。 调整酶切温度、时间、buffer 体系等,可以解决酶切杂带或切不开的问题。 6. PCR 扩增不出条带/条带弱/非特异条带怎么办? ①检查模板 DNA 是否存在降解,此外模板的上样量过高或者过低,也会影响片段的扩增; ②重新设计引物,比如引物与非目标序列同源性高可导致非特异扩增或无扩增产物,引物自身形成发夹结构、引物二聚体从而影响模板结合等。可以借助专业性软件检查引物结构并重
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