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- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海抚生
- 库存:
20
- 灵敏度:
0.156ng/mL
- 样本:
血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本
- 标记物:
血清/血浆
- 适应物种:
大鼠、小鼠、人、植物
- 应用:
ELISA试剂盒
- 检测方法:
ELISA法
- 检测范围:
0.312ng/mL-20ng/mL
- 规格:
48T/96T
| 规格: | 48T | 产品价格: | ¥1500.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 96T | 产品价格: | ¥2200.0 |
| 产品名称 | 人肿瘤易感基因101(TSG101)ELISA试剂盒 | 英文名称 | Human TSG101 ELISA Kit |
| 灵敏度 | 0.156ng/mL | 检测范围 | 0.312ng/mL-20ng/mL |
| 产品货号 | A100240 | 用途 | 仅供科研研究实验 |

通过特异性抗人TSG101单克隆抗体包被于微孔板,与样本中的TSG101结合形成固相抗体复合物。加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的检测抗体后,形成“捕获抗体-TSG101A-检测抗体”的三明治结构。经洗涤去除未结合物质,加入TMB底物显色,HRP催化TMB产生蓝色产物,在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品浓度。
数据及参考曲线:

| 校准品浓度(ng/ml) | 20.00 | 10.00 | 5.00 | 2.50 | 1.25 | 0.63 | 0.31 | 0.00 |
| OD450/630值 | 2.716 | 1.605 | 0.794 | 0.488 | 0.378 | 0.172 | 0.092 | 0.043 |
| 校正OD值 | 2.673 | 1.562 | 0.751 | 0.445 | 0.335 | 0.129 | 0.049 | 0.000 |


该方法采用双抗体夹心ELISA技术:
微孔板预先包被特异性抗人TSG101单克隆抗体(捕获抗体);
加入待测样本后,样本中的TSG101与固相抗体结合;
随后加入生物素化或HRP标记的检测抗体,形成“捕获抗体-TSG101A–检测抗体”复合物;
洗涤后加入HRP标记的亲和素(若使用生物素-亲和素系统),再加入TMB底物显色;
HRP催化TMB生成蓝色产物,酸性终止液使其变为黄色;
在450nm波长下测定吸光度(OD值),颜色深浅与TSG101胰淀素浓度呈正比,通过标准曲线计算浓度。
公司正在出售的产品:
| 小鼠卵巢内膜细胞 | 大鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)ELISA试剂盒 |
| 小鼠鼓膜上皮干细胞 | 大鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA试剂盒 |
| 人心脏微血管内皮细胞 | 人抗突触前膜抗体(PsmAb)ELISA试剂盒 |
| 兔海马神经元细胞 | 人半胱氨酸蛋白酶抑制剂A(CSTA)ELISA试剂盒 |
| 小鼠卵巢微血管内皮细胞 | 大鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒 |
| 小鼠关节软骨细胞 | 大鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA试剂盒 |
| 人牙龈成纤维细胞 | 人抗心磷脂抗体IgA(ACA-IgA)ELISA试剂盒 |
| 兔脑动脉血管内皮细胞 | 人白介素18(IL-18)ELISA试剂盒 |
| 兔皮层神经元细胞 | 大鼠氢化可的松(HYD)ELISA试剂盒 |
| 小鼠脉络膜黑色素细胞 | 大鼠Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)ELISA试剂盒 |
| 小鼠颌骨成纤维细胞 | 人抗眼肌抗体(EMAb)ELISA试剂盒人肿瘤易感基因101(TSG101)ELISA试剂盒 |
| 人真皮成纤维细胞 | 大鼠Bcl-2相关X蛋白(BAX)ELISA试剂盒 |
| 兔支气管上皮细胞 | 大鼠热休克蛋白60(Hsp-60)ELISA试剂盒 |
| 人牙周膜成纤维细胞 | 大鼠Ⅰ型前胶原N端前肽(PⅠNP)ELISA试剂盒 |

1.试剂提前室温平衡 30 min,浓缩洗涤液按说明书稀释配制。
2.设置空白孔、标准品孔、待测样品孔,精准加样后封板。
3.37℃恒温孵育结合反应,结束后弃孔内液体拍干。
4.加满洗涤液浸泡清洗,重复洗板 3–5 次,彻底去除未结合杂质。
5.除空白孔外,每孔加入 HRP 酶结合物,再次 37℃温育。
6.重复洗板流程洗净游离酶标抗体,保证背景干净。
7.依次加入显色液避光显色,待梯度蓝色清晰显现。
8.加入终止液终止反应,颜色由蓝转黄,即刻用酶标仪读取 OD 值。
9.根据标准曲线拟合计算,得出样本目标物质浓度。
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文献和实验样本,上样,做 WB。 超离法由于 BCA 测定的浓度数值低,用了最大上样量 25 ul,试剂盒法用的体积少一些,换算后每孔的蛋白总量如下: 样本名 蛋白总量 ug/孔 UC-1 4.50 UC-2 3.50 SXX-1 25.00 SXX-2 25.00 UXX-1 25.00 UXX-2 25.00 选用外泌体标志物 CD9 和 TSG101 作为本次的检测指标,实验结果如下: 1、在 CD9 指标检测中,超离法的两个样本 UC-1 和 UC-2 尽管每孔
(ALIX)、肿瘤易感基因 101 蛋白(TSG101)、热休克蛋白(HSP70、HSP90),以及细胞分泌的特异性蛋白。其中 CD9、CD63、HSP70、TSG101 是外泌体常用的鉴定蛋白。 流式细胞术检测:外泌体可以先进行荧光标记,再通过流式细胞仪检测外泌体表面标记蛋白。但是传统的流式细胞仪检测样本的颗粒大小是 300-500 nm,而外泌体直接都在 300 nm 以下,因此,可能大量的外泌体检测不到,造成分析不太准确。 ELISA 检测 :根据外泌体的表面标志物,如 CD9、CD63 进行
电镜 纳米颗粒跟踪分析法:简称NTA,该方法能保证外泌体原始状态、检测速度快,检测后能提供外泌体粒径和浓度信息。 图四 NTA检测图 Western blot分子标志物检测:外泌体标志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;细胞质蛋白,如肌动蛋白(Actin)和钙磷脂结合蛋白(Annexins);参与生物功能的分子,如凋亡转接基因2互作蛋白X(ALIX)、肿瘤易感基因101蛋白(TSG101)、热休克蛋白(HSP70、HSP90),以及细胞分泌的特异性蛋白。 图五
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