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- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海抚生
- 库存:
20
- 灵敏度:
0.078ng/mL
- 样本:
血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本
- 标记物:
血清/血浆
- 适应物种:
大鼠、小鼠、人、植物
- 应用:
ELISA试剂盒
- 检测方法:
ELISA法
- 检测范围:
0.156ng/mL-10ng/mL
- 规格:
48T/96T
| 规格: | 48T | 产品价格: | ¥1500.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 96T | 产品价格: | ¥2200.0 |
通过特异性抗人PIAS3单克隆抗体包被于微孔板,与样本中的PIAS3结合形成固相抗体复合物。加入HRP标记的检测抗体后,形成抗体-抗原-酶标抗体三明治结构。经洗涤去除未结合物质,加入TMB底物显色,HRP催化TMB转化为蓝色,酸性终止液使颜色变为黄色。颜色深浅与PIAS3含量成正比,酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品浓度。
性能参数:
产品名称:人激活STAT蛋白抑制因子3(PIAS3)ELISA试剂盒
英文名称:Human PIAS3 ELISA Kit
产品规格:48T/96T
检测样本:血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本。
检测范围:0.156ng/mL-10ng/mL
灵敏度:0.078ng/mL
特异性:与人其他细胞因子无交叉反应。
有效期:6个月(2-8℃保存)。
检测流程:
1、固相抗体包被
微孔板预先包被一种高特异性的单克隆抗体(捕获抗体),该抗体能专一识别并结合人激活STAT蛋白抑制因子3(PIAS3)中的特定表位。
2、样本加入与抗原结合
将待测样本(如血清、血浆或细胞培养上清)加入微孔中,样本中的PIAS3会与包被抗体结合,形成“固相抗体-抗原”复合物。未结合的成分在后续洗涤步骤中被清除。
3、酶标二抗结合
加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的第二抗体(检测抗体),该抗体识别PIAS3的另一个独立表位,从而形成“捕获抗体-PIAS3-检测抗体”的三明治结构。
4、显色反应
洗涤去除未结合的酶标抗体后,加入TMB底物溶液。HRP催化TMB产生蓝色产物,在酸性终止液(如硫酸)作用下变为黄色。
5、定量分析
使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),颜色深浅与样本中PIAS3浓度呈正相关。
数据及参考曲线:
| 校准品浓度(ng/ml) | 10.00 | 5.00 | 2.50 | 1.25 | 0.63 | 0.31 | 0.16 | 0.00 |
| OD450/630值 | 2.680 | 1.540 | 0.838 | 0.493 | 0.368 | 0.155 | 0.093 | 0.025 |
| 校正OD值 | 2.655 | 1.515 | 0.813 | 0.468 | 0.343 | 0.130 | 0.068 | 0.000 |

一. 试剂准备
将试剂盒所有组分平衡至室温(20–25℃,≥30min);浓缩洗涤液按 1:19 稀释配制工作液。
标准品用标准品稀释液复溶,梯度稀释,配置系列浓度梯度标准溶液,备用。
二. 实验流程
加样:设置空白孔、标准孔、样本孔,每孔加入 100 μL 对应标准品 / 待测样本,封板,37℃恒温孵育 90 min。
洗涤:弃净孔内液体,每孔加满洗涤工作液,静置 30 s,甩干拍净,重复洗涤 5 次。
加酶结合物:每孔加入 100 μL HRP 标记检测抗体,封板混匀,37℃孵育 60 min。
洗涤:重复上述洗涤步骤 5 次,彻底拍干微孔。
显色:每孔避光加入 90 μL TMB 底物显色液,轻柔混匀,37℃避光显色 15 min。
终止:按同等顺序每孔快速加入 50 μL 终止液,轻晃混匀,溶液由蓝转黄。
读数:15 min 内,酶标仪 450 nm 波长测定各孔 OD 值,拟合标准曲线计算样本含量。
三. 关键质控要点
全程孵育使用专用封板膜,防止液体蒸发、交叉污染。
洗涤充分为实验核心,残留洗液易造成背景偏高、假阳性。
TMB 显色液避光储存,现用现加,严禁接触氧化剂。
加终止液顺序需与显色加样一致,避免局部色差、绿色残留。
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