大鼠（Rat）5羟色胺（5-HT）ELISA检测试剂盒

大鼠（Rat）5羟色胺（5-HT）ELISA检测试剂盒

 

货号：DM-F250

规格：96T/48T

一、产品概述

上海笃玛生物科技有限公司是专注于生命科学领域的高科技企业，秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念，致力于为全球科研工作者提供高质量的生物学试剂及解决方案。本试剂盒是公司核心产品线之一，采用自主研发的高特异性抗体对，基于经典的双抗体夹心法原理构建，可精准定量检测样本中的含量。

二、检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA技术：将特异性捕获抗体预包被于酶标板微孔内；实验时，向微孔中加入标准品或待测样本，样本中的检测指标会与包被抗体特异性结合；洗涤去除未结合的杂蛋白后，加入生物素标记的检测抗体，形成“包被抗体-目标抗原-检测抗体”的免疫复合物；随后加入链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶（HRP），生物素与链霉亲和素发生特异性结合，使HRP牢固结合于免疫复合物上；最后加入TMB显色底物，HRP催化底物发生显色反应，颜色深浅与样本中检测指标的浓度呈正相关。通过酶标仪在450nm波长处测定各孔OD值，结合标准曲线即可计算出待测样本的浓度。

三、试剂盒的组分

本试剂盒包含完成一次ELISA检测所需的全部核心组分，各组分经严格质检，确保实验可靠性，具体如下：

四、样本处理

1. 血清样本：采集静脉血后，室温静置2-4小时，3000rpm离心10分钟，收集上层血清，避免溶血，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

2. 血浆样本：使用抗凝管（EDTA、肝素等）采集血液，采集后立即轻轻颠倒混匀，3000rpm离心10分钟，收集上层血浆，-20℃或-80℃保存。

3. 组织培养上清：细胞培养完成后，3000rpm离心5分钟，去除细胞碎片，收集上清液，-20℃保存。

4. 细胞/组织裂解液：取适量细胞或组织样本，加入预冷的裂解液，冰浴匀浆后，4℃、12000rpm离心15分钟，收集上清液，-80℃保存。

5. 所有样本在检测前需恢复至室温，震荡混匀，若有沉淀需再次离心去除，避免影响检测结果。根据样本实际情况，可使用样本稀释液进行适当稀释，确保检测浓度落在标准曲线范围内。

五、实验步骤

1. 试剂准备：实验前将所有试剂盒组分及样本恢复至室温（25℃左右），浓缩洗涤液用蒸馏水稀释至1×工作液，浓缩检测抗体、链霉亲和素-HRP按说明书比例用样本稀释液稀释至工作液，现配现用。

2. 加样：根据实验需求确定所需板条数量，空白孔加入50μL样本稀释液，标准品孔加入50μL不同浓度的标准品工作液，待测样本孔加入50μL处理后的样本（已稀释的样本直接加入，未稀释样本可根据情况用样本稀释液1:1稀释后加入）；随后向所有孔中加入50μL生物素标记检测抗体工作液，轻轻振荡混匀。

3. 孵育：盖上封板膜，置于37℃恒温箱中孵育60分钟。

4. 洗涤：小心揭开封板膜，甩去孔内液体，每孔加满1×洗涤液，静置30秒后甩去，用吸水纸拍干；重复此洗涤步骤3次，若使用洗板机，洗涤次数可增加1次。

5. 加酶：每孔加入80μL链霉亲和素-HRP工作液，轻轻振荡混匀，盖上封板膜，37℃孵育30分钟。

6. 洗涤：重复步骤4的洗涤操作，彻底去除未结合的酶结合物。

7. 显色：每孔依次加入50μL显色液A和50μL显色液B，轻轻振荡混匀，盖上封板膜，37℃避光孵育10分钟，此时阳性孔会逐渐呈现蓝色。

8. 终止：取出酶标板，迅速向每孔加入50μL终止液，轻轻振荡混匀，蓝色会立即转为黄色。

9. 检测：加入终止液后10分钟内，使用酶标仪在450nm波长处测定各孔的OD值（若需校正，可在630nm波长处测定参考OD值，最终检测OD值=450nm OD值-630nm OD值）。

六、结果计算

1. 首先计算每个标准品、空白孔及样本孔的平均OD值（复孔检测时），空白孔OD值作为阴性对照，用于扣除背景干扰。

2. 以标准品浓度为横坐标（X轴，对数坐标），对应的OD值为纵坐标（Y轴，线性坐标），使用专业绘图软件（如Excel、GraphPad Prism）绘制标准曲线，计算回归方程（R²值应≥0.99，确保标准曲线的可靠性）。

3. 将扣除背景后的样本OD值代入回归方程，计算出样本中[检测指标]的初步浓度，再根据样本的稀释倍数计算出样本的实际浓度。

七、试剂盒性能

1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2. 灵敏度：最低检测浓度如说明书所示。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

6. 有效期：6个月

八、储存与运输

1. 试剂盒未开封时，所有组分需密封置于2~8℃冷藏保存，避免冷冻，其中标准品冻干品可置于-20℃长期保存。

2. 试剂盒开封后，预包被酶标板需密封防潮保存，剩余试剂需按原储存条件保存，避免反复冻融，开封后建议在1个月内用完。

3. 运输过程采用冷链运输（2~8℃），避免高温、剧烈震荡，确保产品性能稳定。

九、注意事项

实验前请仔细阅读本说明书，严格按照实验步骤操作，确保实验条件（温度、孵育时间）符合要求。

所有试剂使用前需充分混匀，但避免剧烈震荡产生大量泡沫，以免影响加样精度。

洗涤步骤至关重要，需确保洗涤充分，避免未结合的杂蛋白或酶结合物残留，导致背景值偏高。

显色反应需避光进行，终止液加入后应立即检测OD值，避免放置时间过长导致颜色消退，影响检测结果。

实验所用样本、试剂及废弃物均需按生物安全规范处理，避免交叉污染。

本试剂盒仅用于科研用途，不用于临床诊断。

十、售后服务

上海笃玛生物科技有限公司拥有专业的技术服务团队，为您提供全程技术支持。如您在产品使用过程中有任何疑问，或对产品质量有异议，请及时联系我们的技术顾问，我们将在24小时内响应，为您提供实验方案优化、问题排查等专业服务。