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- 2026年06月03日
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南京信帆生物技术有限公司
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血清是由血浆去除纤维蛋白原而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体,具有维持血液的正常粘度、酸碱度、渗透压等作用。它主要由水和各种化学成分组成，这些化学成分包括白蛋白，α1、α2、β、γ-球蛋白，甘油三酯，总胆固醇，谷丙转氨酶等。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。对血清的成分和作用的研究虽有很大进展，但仍存在一些问题。
主要是：
第一：血清的成份可能有几百种之多，对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚，尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识，这给研究工作带来许多困难；
第二：血清都是批量生产，各批量之间差异很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保证每批血清的相似性极为困难，从而使实验的标准化和连续性受到限制；
第三：不能排除血清中含有易变物质，这被认为是“瓶中恶化”的原因之一。
如何避免产生沉淀物
1、解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法（-2℃至4℃至室温），若血清解冻时改变的温度太大（如-20℃至37℃），实验显示非常容易产生沉淀物。
2、解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。
3、请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。
4、血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。 [3]
5、若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。
血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出，放入试管中，不加抗凝剂，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成胶冻。凝血块收缩，其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点是与血浆最大的区别。而在凝血反应中，血小板释放出许多物质，各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化，如凝血酶原变成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析，都以血清为样品。
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文献和实验一、SP 法 1）脱蜡、水化；2）PBS 洗 2～3 次各 5 分钟；3）3% H2O2（80% 甲醇）滴加在 TMA 上，室温静置 10 分钟；4）PBS 洗 2～3 次各 5 分钟；5）抗原修复；6）PBS 洗 2～3 次各5分钟；7）滴加正常山羊血清封闭液,室温 20 分钟。甩去多余液体。8）滴加Ⅰ抗 50μl，室温静置 1 小时或者4℃过夜或者37℃1小时。9）4℃ 过夜后需在37℃复温45分钟。10）PBS 洗 3 次各 5 分钟；11）滴加 Ⅱ 抗 40～50 μl，室温
, 轻轻漂洗干净。 第三步：免疫荧光染色 视网膜置于3 g· L-1TritonX-100中4 ℃孵育1 h；从TritonX-100中取出后滴加山羊血清室温封闭抗原2 h, 吸去封闭液, 不洗。水浴箱孵育a-SMA单克隆抗体(1:100, 1 g· L-1TritonX-100稀释)37 ℃，3 h。滴少许抗荧光淬灭剂封片, 于荧光显微镜490 nm波长下观察。 操作要点 推挤出视网膜后，建议用眼科手术刀将视网膜切开而不推荐剪刀剪，因为眼科剪较厚，容易将视网膜挤压变形，当然熟练
缓冲盐水 (10X TBS)：在 800 ml 蒸馏水中加入 24.2 g 三羟甲基氨基甲烷（Trizma base, C4 H11NO3）和 80 g 氯化钠（NaCl）。用浓盐酸将 pH 调节到 7.6，定容至 1 L。6. 抗体稀释液a. SignalStain? 抗体稀释液 #8112b. TBST / 5% 正常山羊血清： 5 ml 1 X TBST 中添加 250 ?l 正常山羊血清。c. PBST / 5% 正常山羊血清： 5 ml 1 X PBST 中添加 250 ?l 正常山羊血清
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