11585614910默克罗氏Roche DIG-High

地高辛（DIG）产品选择指南——选择合适的标记

标记DNA探针   如果您有足够量的高纯度模板，建议您采用随机引物标记方法的DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I 和II。这两个试剂盒包含了标记、封闭、杂交和检测所需要的所有试剂，是真正意义上的一站式服务的试剂盒。二者之间的差别在于检测方法的不同：Starter Kit

非放射性Dig－dUTP

 [原理] DNA是通过异羟基洋地黄毒苷（digoxigenin，Dig）配基标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸（dUTP）随机插入结合而被标记。dUTP通过间臂连结类固醇半抗原异羟基洋地黄毒苷酸基，形成Dig-dUTP，杂交反应后，杂交的靶DNA通过酶联免疫法与一个抗体复合物[抗异羟基洋地黄毒苷配基碱性磷酸酶复合物（Dig）Ap]结合，接着在5-溴-4氯-3-吲哚磷酸盐（X-磷酸盐）和硝基四氮唑蓝（NBT）存在下，由酶催化反应，在杂交部位形成蓝紫色带或颗粒。 ［操作］ 1．转移 通过打点吸渍

我收集的几个Northern杂交protocol（同位素，DIG，生物素等），供大家参考！

液转入一新的离心管中，加入0.1倍体积3mol/L乙酸钠和2倍体积乙醇沉淀过夜。 5．4℃下12000rpm离心20min.，弃去上清液，沉淀用70%乙醇洗涤一次，真空干燥。 6．线性化质粒DNA按0.25μg/μl的浓度重悬于DEPC-H2O中，取10μl电泳检测线性化质量，其余于-20℃下保存备用。 五、RNA探针制备（根据the DIG system user's guide） A． 地高辛标记的体外转录 试剂及其配制（试剂盒提供）： 10× NTP标记混合物：in Tris