Co-IP专用细胞裂解液

Co-IP专用细胞裂解液产品说明书

【产品简介】
       细胞裂解液(Cell lysis buffer )，是一种在非变性条件下裂解细胞或组织样品从而制备蛋白样品的裂解液。根据实验目的，选择不同成分的裂解液，裂解细胞或组织样品可以用于 PAGE，Western，免疫沉淀（immunol precipitation，IP）、免疫共沉淀（co-IP）和 ELISA 等。本品可以用于动物、植物的细胞或组织样品，也可以用于真菌或细菌样品。由于含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
【保存】
       2~8℃保存，有效期 12 个月。
【使用方法】
1.对于培养细胞样品：
1.1 取适当量的裂解液，在使用前加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶/磷酸酶抑制剂混合物。
1.2 细胞裂解
1.2.1 对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（尽量去除可能对实验产生干扰的细胞外蛋白）。按照 6 孔板（约 1x106 个细胞）每孔加入 50-100 微升裂解液的比例加入裂解液。       用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞 1—2 秒后，细胞就会被裂解。植物细胞宜在冰上裂解 2—10min。
1.2.2 对于悬浮细胞：离心收集细胞，轻轻涡旋或者弹击管底以把细胞尽量分散开。按照 6 孔板（约 1x106 个细胞）每孔细胞加入 50-100 微升裂解液的比例加入裂解液。轻弹管底以充分裂解细胞。充分裂解后       应没有明显的细胞沉淀。如细胞量较多，适当增加裂解液体积。
1.2.3 对于细菌或酵母：对于 1ml 菌液或酵母液，离心去上清，如果有必要可以使用 PBS 洗涤一次，充分去除液体后，轻轻涡旋或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入 100-200 微升裂解液，轻轻涡旋或       者弹击管底以混匀，冰上裂解 2—10min。如果希望获得更好的裂解效果，细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶消化，然后再使用本裂解液进行裂解，或选择我们公司生产的细菌专门裂解液进行实验。
1.2.4 裂解液用量说明：通常 6 孔板每孔细胞或者 1ml 的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入 100 微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 150 微升或 200 微升。每 100 万         动物细胞用 100 微升本产品裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为 2—4mg/ml。

1.3 充分裂解后 10000—14000g，4 度，离心 3—5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
2.对于组织样品：
2.1 把组织剪切成细小的碎片。
2.1.1 取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
2.1.2 按照每 20 毫克组织加入 100-200 微升裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量）
2.1.3 用玻璃匀浆器匀浆，或使用匀浆器，直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液进行裂解。
2.1.4 充分裂解后，10000—14000g，4 度，离心 3—5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。例如，每 20mg 冻存的小鼠肝脏组织用 200 微升本裂解液裂解后获得的         上清，其蛋白浓度约为15—25mg/ml。
【注意事项】
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 本产品仅限科研使用。