LCA磁珠(30-150μm) LCA Beads

产品简介
扁豆凝集素（Lens Culinaris Agglutinin，简称 LCA）是一种从小扁豆（扁豆）种子中分离出来的金属蛋白，由两个 17kD 的大亚基和两个 8kD 的小亚基构成，分子量约 49kDa，可以特异性的与含有 α-D-甘露
糖、α-D-葡萄糖或空间相关残基的分子结合。海狸 LCA 磁珠是一种将扁豆凝集素与琼脂糖偶联，利用凝集素和糖蛋白糖链之间的特异可逆性的相互识别作用分离纯化糖蛋白，用于富集或纯化糖蛋白的一种新型亲和磁珠。磁性分离方法不需经过离心、过滤、色谱等复杂的操作，只需要加一个外加的磁场就可以将目标蛋白分离出来，省去了繁多的样品预处理和样品分离过程。与传统的分离纯化方法相比，磁性分离具有快速，高效，高纯度等优点。

产品信息
产品信息：   LCA 磁珠
基质 高度交联的：   4%琼脂糖
配体：   小扁豆凝集素
粒径范围：   30-150µm
载量：   ≥13mg 甲状腺球蛋白/mL 介质
储存液：   20% 乙醇，150mM NaCl，1mM CaCl2，1mM MnCl2
浓度：    10% V/V
储存温度：   2～8℃
注1：磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性有关，此处仅做参考值。
注2：1mL 磁珠悬液中包含 100µL LCA 磁珠。

适用范围
适用于来分离和纯化一些糖蛋白、膜蛋白、 糖脂、 多糖、带甘露糖苷或葡糖苷残基的膜囊泡、IgM、激素脂蛋白等。

操作流程

1. 缓冲液的准备
推荐使用以下缓冲液
结合缓冲液：20mM Tris-HCl，0-0.5M NaCl，1mM CaCl2，1mM MnCl2，pH 7.4。
洗脱液：20mM Tris-HCl，0.5M NaCl，1mM CaCl2，1mM MnCl2，0.1-1.0M α-D-甲基甘露糖苷或 α-D甲基葡萄糖苷，pH 7.4。

注：
1）洗脱液中 α-D-甲基甘露糖苷或 α-D-甲基葡萄糖苷浓度可根据目标蛋白的吸附能力进行调整。
2）甘露糖和葡萄糖也可以作为竞争洗脱物质，但洗脱能力相对较弱。
3）结合能力较强的物质可采用降低洗脱液 pH 洗脱，但建议不要低于 3.0。
4）可采用硼酸盐作为洗脱液，如 0.1M 硼酸盐，pH 6.5。
5）对于强结合的蛋白，可以在洗脱缓冲液中加入 1%的脱氧胆酸盐或其他去污剂如 SDS，以促进洗脱。

2. 纯化操作流程
1）移取 200μL LCA 磁珠悬液（10% V/V）于 1.5mL 离心管中，置于磁性分离器上进行磁性分离，去除上清液。
2）加入 1000μL 结合缓冲液，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，置于垂直混匀仪中，室温混匀 5min，磁性分离，去除上清液。重复此步骤 3 次。
3）加入 1000μL 目标蛋白溶液，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，置于垂直混匀仪中，室温混匀30-45min（结合时间需根据蛋白结合速度快慢进行适当调整）。
4）将离心管置于磁性分离器上进行磁性分离，取上清液，测试目标蛋白浓度。
5）加入 1000μL 结合缓冲液，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，置于垂直混匀仪中，室温混匀 5min，磁性分离，去除上清液。重复此步骤 3 次。
6）加入 500μL 洗脱液，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，置于垂直混匀仪中，室温混匀 30-45min（洗脱时间需根据蛋白结合速度快慢进行适当调整）；磁性分离，取上清液，测试目标蛋白浓度。

注意事项
1、首次使用本产品前，请务必详细阅读本用户手册；
2、磁珠使用和保存过程中应避免冷冻、干燥和高速离心等操作；
3、在使用本产品前，请务必充分振荡使磁珠保持均匀的悬浮状态；
4、请选用质量好的移液器吸头和离心管，以免磁珠贴壁或混合过程发生渗漏引起磁珠的损耗；
5、磁珠与溶液混合过程中，如果溶液粘稠无法通过翻转离心管重悬磁珠，可采用移液器反复吹吸或短时漩涡混合使磁珠充分重悬；
6、用户可根据实际需要保留经磁性分离移去的上清液，进行取样检测，以便分析纯化过程和优化蛋白纯化流程；
7、本产品需与磁性分离器配套使用；
8、本产品仅供研究使用。