人肺癌细胞；A549(提供STR鉴定报告)

【求助】构建人肺癌细胞的cDNA文库

littleyan0418 我现在的任务是要构建人肺癌细胞的cDNA文库，但我不是这个方面科班出身，好多地方还不是很明白，想请教师兄师姐的经验，应该注意些什么。现在对总RNA的提取我有点找不出头绪。麻烦师兄师姐们可以给我分享些这方面的资料和网址吗？非常感谢！！ neuronboy http://www.takara.com.cn/ 价格、试剂盒和说明书都有。呵呵 littleyan0418

A549细胞到底是如何形态

A549 细胞正常状态下都呈长梭形.从你提供的细胞图片看,圆形细胞较多,可能是细胞生长过密,相互挤压所致!还有许多突起,估计是有其他细胞污染,或是培养液使用时间过长，有污染所致，建议更换新鲜培养液，用新瓶传代,密度不要过高! 我们培养的 A549 细胞 答

我培养A549细胞的经验

我也在养A549细胞，也来讲讲自己的经验，希望大家共同学习。我们主要是看细胞的密度，大概有80-90%铺满培养瓶底就可以传代了，时间长短不一，大概有5-7天吧，一瓶一般传3-4瓶，中间一般会有一次换液的。培养基用的是1640+10%的小牛血清+200u/ml庆大霉素。传代时先倒掉就培养基，然后用PBS洗一两次，然后再用0.25%胰酶消化（100ml培养瓶盖住表面大概要两滴管左右），可镜经下观察细胞间已出现细胞胞质回缩变圆，缝隙变大（我的细胞大概要2min左右），即可倒去消化液，加入培养基，吹打