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- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海抚生
- 库存:
20
- 灵敏度:
31.25pg/mL
- 样本:
血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本
- 标记物:
血清/血浆
- 适应物种:
大鼠、小鼠、人、植物
- 应用:
ELISA试剂盒
- 检测方法:
ELISA法
- 检测范围:
62.5pg/mL-2000pg/mL
- 规格:
48T/96T
| 规格: | 48T | 产品价格: | ¥1500.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 96T | 产品价格: | ¥2200.0 |
检测原理:
通过特异性抗人VEGF165单克隆抗体包被于微孔板,与样本中的VEGF165结合形成固相抗体复合物。加入HRP标记的检测抗体后,形成抗体-抗原-酶标抗体三明治结构。经洗涤去除未结合物质,加入TMB底物显色,HRP催化TMB转化为蓝色,酸性终止液使颜色变为黄色。颜色深浅与VEGF165含量成正比,酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品浓度。
性能参数:
产品名称:人血管内皮生长因子165(VEGF165)ELISA试剂盒
英文名称:Human VEGF165 ELISA Kit
产品规格:48T/96T
检测样本:血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本
检测范围:62.5pg/mL-2000pg/mL
灵敏度:31.25pg/mL
特异性:与人其他细胞因子无交叉反应。
有效期:6个月(2-8℃保存)。
检测流程:
1、固相抗体包被
微孔板预先包被一种高特异性的单克隆抗体(捕获抗体),该抗体能专一识别并结合人血管内皮生长因子165(VEGF165)中的特定表位。
2、样本加入与抗原结合
将待测样本(如血清、血浆或细胞培养上清)加入微孔中,样本中的VEGF165会与包被抗体结合,形成“固相抗体-抗原”复合物。未结合的成分在后续洗涤步骤中被清除。
3、酶标二抗结合
加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的第二抗体(检测抗体),该抗体识别VEGF165的另一个独立表位,从而形成“捕获抗体-VEGF165-检测抗体”的三明治结构。
4、显色反应
洗涤去除未结合的酶标抗体后,加入TMB底物溶液。HRP催化TMB产生蓝色产物,在酸性终止液(如硫酸)作用下变为黄色。
5、定量分析
使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),颜色深浅与样本中VEGF165Q
数据及参考曲线:
| 校准品浓度(pg/mL) | 2000.00 | 1000.00 | 500.00 | 250.00 | 125.00 | 62.50 | 31.25 | 0.00 |
| OD450/630值 | 2.697 | 1.593 | 0.808 | 0.495 | 0.379 | 0.156 | 0.100 | 0.033 |
| 校正OD值 | 2.663 | 1.560 | 0.775 | 0.462 | 0.346 | 0.123 | 0.067 | 0.000 |

操作步骤:
1.试剂提前室温平衡 30 min,浓缩洗涤液按说明书稀释配制。
2.设置空白孔、标准品孔、待测样品孔,精准加样后封板。
3.37℃恒温孵育结合反应,结束后弃孔内液体拍干。
4.加满洗涤液浸泡清洗,重复洗板 3–5 次,彻底去除未结合杂质。
5.除空白孔外,每孔加入 HRP 酶结合物,再次 37℃温育。
6.重复洗板流程洗净游离酶标抗体,保证背景干净。
7.依次加入显色液避光显色,待梯度蓝色清晰显现。
8.加入终止液终止反应,颜色由蓝转黄,即刻用酶标仪读取 OD 值。
9.根据标准曲线拟合计算,得出样本目标物质浓度。
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文献和实验人血管内皮生长因子 165(VEGF 165)ELISA试剂盒 说明书
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