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上海信帆生物
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2年
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10g
缓冲液的配制和应用
为了配制一定pH的缓冲溶液,首先选定一个弱酸,它的pKaφ尽可能接近所需配制的缓冲溶液的pH值,然后计算酸与碱的浓度比,根据此浓度比便可配制所需缓冲溶液。
以上主要以弱酸及其盐组成的缓冲溶液为例说明它的作用原理、pH计算和配制方法。对于弱碱及其盐组成的缓冲溶液可采用相同的方法。
缓冲溶液在物质分离和成分分析等方面应用广泛,如鉴定Mg2+ 离子时,可用下面的反应:
白色磷酸铵镁沉淀溶于酸,故反应需在碱性溶液中进行,但碱性太强,可能生成白色Mg(OH)2沉淀,所以反应的pH值需控制在一定范围内,因此利用NH3·H2O和NH4Cl组成的缓冲溶液,保持溶液的pH值条件下,进行上述反应。
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文献和实验放冰箱中一般可保存1~2 月,3 号贮液只能保存一周。如有不溶物要过滤。 表中 试剂 :Acr——丙烯酰胺:Bis——亚甲基双丙烯酰胺;TEMED——四甲基乙二胺;Tris——三羟甲基氨基甲烷。
: a)氯(-),由胶缓冲液提供,充当快速移动的先导离子。b)MES或MOPS(-),(取决于电泳缓冲液的选择)充当后随离子。MES: 2-(N-morpholino)ethane sulfonic acidMOPS: 3-(N-morpholino)propane sulfonic acidc)Bis-Tris碱(+)充当出现在胶中的共同离子,Tris(+)由电泳缓冲液提供。合并低pH值的胶缓冲液(pH6.4)和电泳缓冲液(pH7.3-7.7)导致了电泳时显著降低的工作pH值。图2 NuPAGE®
5.高压灭菌锅 6.超净工作台 7.微量移液器 8.eppendorf tupe、tip [实验材料] 1.葡萄糖 2.三羟甲基氨基甲烷(Tris) 3.乙二胺四乙酸(EDTA) 4.氢氧化钠 5.十二烷基硫酸钠(SDS) 6.乙酸钾 7.冰乙酸 8.氯仿 9.乙醇 10.胰RNA酶 11.氨苄青霉素 12.蔗糖 13.溴酚蓝 14.酚 15.β巯基乙醇 16.盐酸 17
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