Tartrate Resistant Acid Phosph

产品描述

酸性磷酸酶（Acid Phosphatase，ACP），是一类磷酸酯酶，在酸性条件下可以催化磷酸酯键的水解。酸性磷酸酶是一个蛋白家族，哺乳动物中分子量从18kD到100kD不等。ACP主要分为两类，一类为抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate resistant acid phosphatase，TRAP），一类为抗氟酸性磷酸酶（Fluoride resistant acid phosphatase，FRAR）。 

TRAP是一种糖基化的含金属蛋白酶，在破骨细胞（Osteoclast）和破软骨细胞（Chondroclast）中高表达，在活化的巨噬细胞和神经元中也有表达。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的TRAP均在细胞滤泡中，并非释放到血液中。血液中TRAP绝大部分来源于破骨细胞，因此，测量血液中TRAP可以了解破骨细胞的功能状态。TRAP在细胞信号转导、细胞增殖和分化等方面起重要作用，也和活性氧产生和铁离子转运等有关。 

本抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒（Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit, TRAP Stain Kit）以萘酚AS-BI为底物，酸性pH下被ACP水解生成磷酸和萘酚，萘酚与重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞胞浆中。若细胞内ACP含抗酒石酸活性，则呈阳性反应。本品可用于新鲜血涂片、细胞涂片和冰冻切片染色。

保存与运输方法

保存：-20℃~RT保存，各组分保存详见标签，12个月稳定。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） TRAP染色液易失效，请务必现配现用。

2） GBC染色液请不要置于-20℃冻存，需2-8℃避光保存。

3） 样本需新鲜，取材后请立即处理，否则会影响酶活性。

4） 对于冰冻切片染色，应尽量减少切片在室温暴露的时间。

5） 对于血液涂片，推荐皮肤穿刺血涂片，晾干后及时染色

6） 本品不建议用于石蜡切片染色。

7） 组织固定需在4℃冰箱进行，时间不要超过24h，否则酶活性会减弱或消失。

8） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤 

实验前准备材料：蒸馏水，恒温箱，载玻片，光学显微镜 

一、 血液、细胞涂片

1.1 推片：取新鲜血液或骨髓涂片置于载玻片上，推玻片与载玻片保持30°，置于血液或细胞滴液的正前方，稍往后移与血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前方滑动置铺满血膜为止。

1.2 自然晾干，TRAP固定液4℃固定30s~3min，多数情况1min内即可。

1.3 水洗、稍微晾干（不易过分干燥）。

1.4 切片入现配的TRAP染色液，置于37℃温箱，避光浸染45~60min，水洗。

1.5 复染：用苏木素染色液复染3~5min。

1.6 水洗、晾干、镜检。

二、 冰冻切片染色 

2.1 冰冻切片回温至37℃，水中浸泡1~2min。

2.2 自然晾干，TRAP固定液4℃固定1~3min

2.3 水洗、稍微晾干（不易过分干燥）。

2.4 切片入现配的TRAP染色液，置于37℃温箱，避光浸染45~60min，水洗。

2.5 复染：用苏木素染色液复染5~8min。

2.6 水洗、晾干、镜检。

三、 染色结果