2× High-Fidelity PCR Master Mi

产品简介

本品是即用型2×预混合溶液，包含High-Fidelity DNA Polymerase，dNTPs以及优化的缓冲体系。预混液中添加了常温可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的两种单克隆抗体，可简便地进行高特异性的Hot Start PCR。预混液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增目的片段的长度可长达13 kb，该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍，是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。适用于复杂模板的扩增，扩增产物为平末端。

本试剂盒具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，反应体系只需加入引物和模板即可，并可以通过两步法的程序进行扩增，简化了实验步骤，节省了时间。本产品中含有电泳指示染料，PCR产物可直接进行电泳。另外，该产品还含有特异保护剂，使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。

产品储存

-25~-15℃保存，有效期1年。

操作注意

1) 为了您的安全和健康，请穿实验服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防护性措施进行实验操作。

2) 本产品仅作科研用途！

操作说明

推荐PCR反应体系

表1 PCR反应体系

【注】：

1) *在终浓度1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶、2 mM Mg2+和200 μM的dNTPs。

2) ** PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM，推荐0.4 μM。

3) ***不同模板的推荐使用量（25 μL反应体系）:

推荐PCR反应程序

1) 两步法程序(优先推荐)

表2 PCR反应程序

2）三步法程序(常规程序)

【注】：

a. *预变性温度和时间：推荐温度：98°C，时间：3 min，高GC含量模板5-10 min。

b. **退火温度和时间：推荐温度：60°C，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

c. ***延伸温度和时间：推荐温度：72°C。时间：30 sec/kb，复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。

3）梯度温度退火程序(难扩增基因推荐程序)

4）不同扩增程序下的特点