Deoxyribonuclease I (DNase I)

产品描述

脱氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，缩写DNase I，在大多数细胞和组织中都能发现的一种核酸内切酶，偏好切割邻近嘧啶的磷酸二酯键，产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸，平均消化产物最小为多聚四核苷酸。Mg2+存在条件下，DNase I可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点；而在Mn2+存在条件下，DNase I识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I可水解多种形式DNA，如单链DNA、双链DNA，甚至染色质（其切割速率受组蛋白影响）。

脱氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，缩写DNase I，最早从胰腺中分离而来，至今哺乳动物胰腺也是最主要的来源之一。DNase I以两对二硫键结合的多种糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范围是pH 7-8，DNase的活性依赖于Ca2+，并可被二价金属离子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保护酶使其不被水解，而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原来的1/2。

本品来自牛胰腺，亲和色谱纯化制备所得，常用于去除蛋白或RNA样品中的DNA，或者用于向DNA中引入缺口使标记碱基插入DNA。本品以冻干粉形式供应，比活≥500 Kunit Units/mg蛋白。

产品特性

1）   CAS NO：9003-98-9

2）   分子量：~31 kDa

3）   同义名：DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A 脱氧核糖核酸 5′-寡核苷酸水解酶，脱氧核糖核酸酶A

4）   比活力：≥500 Kunit Units/mg protein

5）   活力定义：在50µl含40mM Tris-HCl, pH8.0，2.5 mM MgSO4，1mM CaCl2的反应缓冲体系中，37℃，10min内完全降解1µg λ-DNA所需的酶量即为一个活力单位。此反应条件下得到的一个单位DNase活力约等于一个Kuntiz unit。

6）   激活剂：多种二价金属离子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

7）   抑制剂：EGTA，EDTA，盐离子浓度（＞100mM）都能降低DNase活性

8）   热失活：含终止溶液（20mM EGTA，pH 8.0）内65℃，处理10min

9）   溶解性：溶于缓冲液（≥1mg/ml in 20mM Tris-HCl（pH 7.5）, 1mM MgCl2, 50% 甘油）

保存与运输方法

保存：冻干粉-20℃干燥冻存，至少3年稳定。

运输：冰袋运输。

使用方法

一、   储存液制备

将低温保存的本品置于室温回温至少20min，低速短时离心后，加入适量缓冲液配制成至少≥1mg/ml储存液（如：20mM Tris-HCl（pH 7.5）, 1mM MgCl2, 50% 甘油），根据一定用量分装置于-20℃保存，至少1年稳定。

二、   反应缓冲液制备

建议1×反应缓冲液：40mM Tris-HCl（pH 8.0）, 2.5mM (up to 10mM) MgSO4，1mM (up to 10mM) CaCl2

【注意】：当起始原料含EGTA，EDTA，其他螯合剂，和/或高浓度盐离子，此时反应缓冲液需更高浓度的Mg2+和Ca2+。

三、使用步骤（作为参考，具体实验可做适当调整）

2.1 往一个RNase-free PCR管内加入：1µg RNA样本；49 µl 1×反应缓冲液；1 µl DNase I, 1 unit/ml；【注意：酶的实际比活力请见产品标签】，混匀。

2.2 37℃孵育10-15min。【注意：消化时间不要超过15min或消化温度不要高于37℃，否则残留的RNase A污染可能会开始降解RNA】

2.3 加入1µl终止液（20mM EGTA，pH 8.0）结合Ca2+和Mg2+，之后于65-70℃失活10min，终止反应。【注意：必须在热失活之前加入终止液】

注意事项

1）  在不同的反应缓冲体系内，用来完全消化一定量DNA所需的DNase I量不同，请根据具体的工作体系或实验经验来决定。【注意：盐浓度＞100mM会降低DNase I活性】

2）  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。