串珠镰刀菌探针法qPCR试剂盒（不含内参）

要想荧光定量 PCR 结果好，这些实验设置要点需记牢

实时荧光定量 PCR 技术（Quantitative Real-time PCR，简称 qPCR）是在 PCR 扩增过程中，通过实时监测荧光信号的变化，达到对待检测样本中初始模板定量分析的方法。当前 qPCR 技术被广泛应用于临床疾病诊断，动物疾病监测，食品安全分析等领域。随着 2020 年新冠疫情在全球的蔓延，qPCR 技术更是因其检测通量高，速度快，操作简便等优势成为新冠病毒核酸检测的有效方法被众人所熟知。 那么为了得到可靠、准确的检测结果，我们需要注意哪些方面呢？其实决定一次实验成功

干货：外泌体研究实操中的常见问题解答

、外泌体 miRNA qPCR 实验选用哪个基因做内参？ 答：外泌体 qPCR 目前没有公认内参基因，本公司检测 miRNA 做的是外参。外参可以最大限度降低对定量实验造成的干扰，适用于内参表达不稳定的外泌体或暂未发现合适内参的其他样品，对目的 microRNA 进行相对定量，替代内参作用。部分文献也会选取U6等作为内参。 16、下游 qPCR 检测时 CT 值过高如何处理？ 答：外泌体 RNA 是微量的存在，首先样品准备阶段确保样品的质量和数量充足（例如血清建议新鲜样本准备 2ml 以上）。有实验

荧光定量 PCR——想要实验结果可靠，各种对照不可少

基因亦可用于对取样量进行均一化。 如果进行的是单管多重实验，还需考虑内参基因的表达量。当内参基因表达量远高于目的基因时，内参基因将优势扩增，体系中的原料消耗速度过快，造成目的基因扩增效率降低。此时可以选择引物浓度降低的 TaqMan 试剂盒（Primer-Limited）对内参基因进行测定。 表 2：常用人类内参基因试剂盒（cDNA） 如何避免污染发生？出现污染怎么办？ 样本间的交叉污染 为了避免样本之间的交叉污染，规范化的取样和样本保存非常重要。不同样本移液时谨记更换枪头，并尽量使用带