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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称:
shRNA沉默效率验证服务
- 提供商:
北京孚博生物
- 规格:
EACH
shRNA沉默效率验证服务
服务简介
RNA干扰实验,靶位点的选择以及相应的shRNA表达载体的构建,是整个RNA干扰实验的重中之重。靶位点选择恰当,shRNA干扰效率高。另外,由于受mRNA高级结构的存在以及序列SNP位点,mRNA翻译效率等诸多因素的影响,设计的shRNA最终在基因蛋白水平的干扰效果不尽相同。
北京孚博生物为您提供shRNA沉默效率验证服务,使用实时定量PCR技术及WB技术,在转录水平上或蛋白水平上检测shRNA对基因的表达抑制效果。
服务内容
| 项目 | 服务流程 | 交付 |
| 外源筛靶shRNA沉默效率验证 | 外源基因和shRNA共转染293细胞 候选靶点和对照载体平行实验 WB实验检测 |
有效性的shRNA序列 项目报告 |
| 内源筛靶shRNA沉默效率验证 | 利用病毒感染目的细胞 候选靶点和对照载体平行实验 采用qPCR进行干扰效率检测 |
孚博生物追求专业化发展道路,始终秉持“质量第一,客户至上,开拓创新求发展”的运营方针,用我们的专业化服务为 您创造更高的价值。
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孚博生物常备库存产品
品牌、货号、名称、包装如下:
Toxin technology#BT202,SEB,1mg;
Toxin technology#BT202red,SEB(Staphylococcal Enterotoxins B),1mg;
Toxin technology#ET404,SEE,100ug;
Toxin technology#DT303,SED,100ug;
Toxin technology#TT606,TSST-1,100ug;
Toxin technology#AT101,SEA,100ug;
Toxin technology#HT101,Alpha Hemolysin highly purified,100ug;
Toxin technology#HP101,Alpha Hemolysin - partially purified,10000Units;
IRA#SE-121-0.72mg,17β-ESTRADIOL,25片;
Listbio#150,Diphtheria Toxin, Unnicked, from Corynebacterium diphtheriae,1mg;
visual protein#IF01-4N,ImmunoFas Adjuvant,1套;
visual protein#HB01-1L,杂交瘤促进生长因子,50mg;
visual protein#BF20-50P,无蛋白封闭缓冲液,20片;
Research Diets#D12492,60%高脂饲料(research diets),12.5KG
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文献和实验设计呢,可以从 Sigma 网站上进行查询。(1)进入 sigma 网站,点击 search for shrna clones。(2)在对话框输入基因名称。(3)在基因 products 里面找到 shrna panels,点击进入。(4)根据自己所要敲除的物种,human 或者 mouse,点击价格进入。(5)如图,得到 shrna 序列,一般左上角带有 VALIDATED 标志的序列,为已知验证序列,而且还可以看到平均敲减效率为 0.66。可优先选择已验证并且敲减效率高的引物序列。(6)选择第一条,得到如下序列
碱基之间切割 mRNA,从而导致转录后基因沉默。siRNA 设计原则RNAi 最终要通过 siRNA 片段与靶基因结合并使之降解,因此,确保高度同源于靶基因而绝无与其他基因同源的 siRNA 序列,是决定 RNAi 特异性的关键所在,也是 siRNA 设计的基本原则。从具有不同沉默效率的 siRNA 序列中筛选出高效的 siRNA 序列,需要经过严密的设计和不断的实验检验。下面我们就来看下 siRNA 设计要遵循哪些原则:1.siRNA 序列在靶基因中的位置从靶基因起始密码子 AUG 下游 50~
技术的突破,科研工作者可以通过非常简单的方式直接从该文库中找到针对某特定基因的shRNA,无需耗时耗力的siRNA设计、合成和验证过程。 siRNA shRNA 使用代价 高 相对较低 持久性 最多2周 可选择获得稳定整合的细胞 宿主类型 细胞系 原代细胞,胚胎干细胞、细胞系 设计 复杂的设计方法 Completed 获取 需要合成 Completed 应用 瞬时转染 瞬时转染、稳定转染、病毒侵染 检测方法 Western杂交、 Western杂交、表型分析、RT











