膀胱癌类器官

膀胱癌类器官是从膀胱癌患者的肿瘤组织中提取细胞，在体外培养形成的三维结构，能够模拟原发肿瘤的基因突变和表达特征。这些类器官可用于药物筛选和疾病建模，是研究膀胱癌的重要工具。

 

一、 传代膀胱肿瘤类器官

注意:建议当膀胱肿瘤类器官的直径达到 100-150 μm 时通过。

1. 将 500 μL 胶原酶/分散酶添加到含有肿瘤类器官的 24 孔板中的类器官培养基中。上下移液管基底膜基质和培养基。在 37 °C 下孵育 20 分钟，然后将细胞收获到 15 mL 试管中><。 注意:在显微镜下检查从基底膜基质中分离的类器官。如果类器官未从基底膜基质上分离，则增加孵育时间或移液更多次。

2. 加入 5 mL 预热的 DMEM，在 4 °C 下以 400 x g 离心管 3 分钟，然后吸出上清液。

3. 使用 1 mL 预热的 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 和 10 μM Y-27632 重悬沉淀。在 37 °C 水浴中孵育 5 分钟。用力上下移液细胞，并使用 5 mL 含 10% FBS 的 DMEM 中和胰蛋白酶。

4. 将试管在 4 °C 下以 400 x g 离心 3 分钟并吸出上清液。

5. 使用 1 mL 预热的类器官培养基重悬沉淀，并计数单个肿瘤细胞的数量。

 

二、. 膀胱类器官的原位移植（图 1A）

1、准备用于原位移植的膀胱肿瘤类器官

1. 移植前，如上所述，将膀胱肿瘤类器官培养 5-7 天。

2. 将 500 μL 胶原酶/分散酶添加到含有肿瘤类器官的 24 孔板中的类器官培养基中。在基底膜基质和培养基上上下移液。在 37 °C 下孵育 20 分钟，并将细胞收集到 15 mL 试管中。

3. 加入 5 mL 预热的 DMEM，在 4 °C 下以 400 x g 离心管 3 分钟，然后吸出上清液。

4. 用 1 mL DMEM 重悬沉淀，并将溶液转移到 90 mm 培养皿中。

5. 在显微镜下，使用 P10 微量移液器拾取 100-100 个肿瘤类器官200，并将它们收集到冰上的微管中。

6. 将试管在 4 °C 下以 400 x g 离心 3 分钟，然后小心弃去上清液。

7. 将细胞沉淀保持在冰上，直到小鼠准备好进行手术。

 

2、粘膜下膀胱壁移植

 

图 1:膀胱肿瘤类器官的原位移植。（A） 膀胱肿瘤类器官原位移植到裸鼠的示意图。（B） 膀胱肿瘤类器官原位移植小鼠的膀胱和 H&E 染色切片的代表性图像。中间面板中框区的放大视图显示在左侧面板中。比例尺 = 500 μm。

 

 

 

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