TIM3

【产品名称】 TIM3抗体试剂/检测试剂盒（免疫组织化学） 【包装规格】 1.浓缩型：100µl/管。 2.浓缩型：1ml/管。 3.预稀释即用型：1ml/管。 4.预稀释即用型：3ml/管。 5.预稀释即用型：7ml/管。 注:浓缩液建议稀释比：1:50 - 1:100 【预期用途】 在常规染色（如：HE 染色）基础上进行免疫组织化学染色，为医师提供诊断的辅助信息。 【检验原理】 利用抗原抗体特异性结合的原理，本试剂作为一抗，在免疫组织化学染色中，特异性结合组织中的抗原，形成抗原抗体复合物，酶标二抗与该复合物特异性结合，并通过酶促 DAB 显色，使得组织切片中相应抗原位置出现着色；显微镜检切片，判读结果。 为了质量控制，建议使用福尔马林固定石蜡包埋的扁桃体组织切片作为阳性对照。 细胞染色定位为细胞膜。抗原修复采用EDTA pH9.0热修复或高压修复。 【主要组成成分】 TIM3，克隆号：IHC003 ，鼠单抗 Tr is缓冲液，牛血清白蛋白（浓缩型为 1%，预稀释即用型为 0.3%）。 【储存条件及有效期】 1.储存条件：浓缩型 -20 °C 冻存，有效期 3 年，预稀释即用型 2-8 °C 保存，有效期为 18 个月。使用时即拿即用，使用后立即放回冰箱 。 2.运输条件：泡沫箱加冰袋密封常温运输，运输时间不超过 1 周。 3.生产日期、失效日期：见标签。 【适用仪器】 适用于免疫组化自动染色机或手工染色。 【样本要求】 本产品适用于10%中性福尔马林固定，石蜡包埋（FFPE ）各类组织细胞样本。病理组织块一般取材 3-5mm 厚，首先用10%中性福尔马林固定，再用乙醇和二甲苯（或二甲苯替代物）脱水透明，石蜡 浸蜡。组织取材后应立即放入中性福尔马林固定，固定时间约为 6-48 h。应当使用低熔点石蜡（＜60 °C）进行组织包埋。石蜡包埋后，制作 4 µm组织切片。切片用载玻片应为正电荷处理过的载玻片，增加组织细胞在载玻片上的粘附性，以保证组织在整个染色过程中不会脱落。制作的切片应当放在2-8 °C 环境中避光保存。 【检测方法】 1.检测所需仪器、设备 移液器、恒温培养箱、计时器、孵育盒、染色架、高压锅等 2.溶液配制 PBS 溶液、DAB 显色液的配制参见各产品说明书 3.实验步骤 3.1 手工染色 3.1.1 脱蜡、水化和抗原修复： 1) 脱蜡前，应将切片在 65°C 恒温箱中烘烤 30 min； 2) 切片置于二甲苯中浸泡，更换 2 次二甲苯，每次浸泡 10 min； 3) 切片置于无水乙醇中浸泡两次，每次 2 min ，95°C 乙醇中浸泡 2 min ，75% 乙醇中浸泡 2 min； 4) PBS 缓冲液洗 3 次，每次 3 min； 5) 高压锅中加入 EDTA pH9.0热修复或高压修复，高火预热；待修复液沸腾后将切片置于其中，完全浸泡组织，盖好锅盖，扣上压力阀继续加热；待限压阀开始转动喷气后调至中火，同时开始计时2.5 min；计时结束后离开热源，放气降压后将高压锅移入冷水中冷却；待锅中液体冷却至室温后取出切片； 6) PBS 缓冲液洗 3 次，每次 3 min。 3.1.2 手工染色步骤： 1) 内源性过氧化物酶屏蔽。使用3%的H₂O₂滴加在切片上室温静置 10 min，此步骤应避光操作； 2) PBS 缓冲液洗 3 次，每次 3 min； 3) 将浓缩型抗体用抗体稀释液稀释 50 倍或直接使用预稀释即用型抗体，滴加 100µl 在切片上，室温静置 1h； 4) PBS 缓冲液洗 3 次，每次 3 min； 5) 除去PBS缓冲液，滴加100µl 酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物于切片上，室温静置 30 min； 6) PBS 缓冲液洗 3 次，每次 3 min； 7) 应用 DAB 显色液显色，3 - 5 min。自来水冲洗终止反应。 8) 应用苏木素反染，滴加苏木素于切片上，静置 10 -30 s，用自来水温柔冲洗结束染色； 9) PBS溶液或自来水冲洗返蓝； 10) 自来水浸泡1次，75%乙醇脱水处理1次，95%乙醇脱水处理1次，100%乙醇脱水处理2次，每次室温下静置3min； 11) 用二甲苯透明 3次，每次 3 min。 12) 使用中性树胶加盖片，完成染色。 3.2 自动染色仪器操作步骤 1) 使用软件按照仪器染色方案设置染色程序，并打印标签； 2) 在自动染色机上装入贴有标签的载玻片；3) 确认试验用试剂已放置在相应位置； 4) 进入仪器操作软件进行操作设置； 5) 运行，进行自动染色。 具体操作参见自动染色机操作手册。 4. 结果判断 每一批次检测样本应同时设立阳性/阴性对照，最终检验结果由具有临床资质的病理医生来判读以便确定检验结果能否用于相对应病人的辅助诊断。 阳性：检测组织目标细胞可观察到棕黄色细胞膜，且无背景染色 。 阴性：检测组织目标细胞未观察到棕黄色细胞膜。