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上海隐智科学仪器有限公司
赛默飞世尔科技(Thermo Fisher Scientific)旗下的Applied Biosystems品牌,在实时荧光定量PCR(qPCR)领域拥有超过25年的深厚积淀,其产品线已成为全球分子生物学实验室的“金标准”。该系列仪器凭借卓越的灵敏度、宽广的动态范围以及智能化的操作体验,广泛应用于基因表达分析、病原体检测、基因分型、拷贝数变异(CNV)分析及高分辨率熔解曲线(HRM)等关键研究领域。其核心优势在于将高性能硬件与直观的软件系统完美结合,无论是基础科研还是高通量筛选,都能提供可靠且可重复的数据支持。
Applied Biosystems实时荧光定量PCR仪采用模块化设计理念,覆盖了从入门级到超高通量的全场景需求。以经典的7500系列为例,该系统采用五色荧光检测通道,支持FAM/SYBR Green I、VIC/JOE、NED/TAMRA/Cy3、ROX/Texas Red和Cy5等主流染料,其创新的光学系统通过冷CCD检测器确保了数据的稳定性和高灵敏度,能够区分低至1.5倍的拷贝数差异,动态范围可达9-10个数量级。而7500 Fast型号则针对快速循环进行了优化,结合TaqMan Fast预混液,可在短短30分钟内完成实验,大幅提升了实验室的周转效率。
在智能化升级方面,QuantStudio系列(如QuantStudio 3/5/6/7 Pro及12K Flex)代表了的技术方向。这些系统配备了触摸屏控制界面,部分高端型号甚至支持人脸识别、语音指令和射频标签(RFID)检测,实现了“即插即用”的便捷体验。QuantStudio 6/7 Pro系统采用白光LED光源(OptiFlex™系统),支持多达6个光学通道和21种荧光组合,提供了极高的染料灵活性。而旗舰级的QuantStudio 12K Flex系统则通过可互换模块设计,支持从标准96孔、快速96孔、384孔到OpenArray芯片(单次运行12,228个反应)的无缝切换,是超高通量筛选和精准医学研究的理想平台。
在软件生态上,Applied Biosystems提供了强大的数据分析工具。其软件不仅支持标准曲线、相对定量(ΔΔCt法)和绝对定量分析,还集成了高分辨率熔解曲线(HRM)分析功能,可用于突变扫描和基因分型。针对合规性要求严格的临床或GMP环境,系统可选配21 CFR Part 11合规模块,提供电子签名、审计追踪和用户权限管理功能,确保数据的安全性和可追溯性。
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参数类别 |
具体指标 |
备注/典型值 |
|---|---|---|
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核心性能 |
灵敏度 |
低至1个拷贝(人RNase P基因) |
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动态范围 |
高达10个数量级(9-10 log) |
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温度均一性 |
±0.4°C(典型值) |
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光学系统 |
检测通道数 |
5色(7500系列)至6色(QuantStudio Pro系列) |
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荧光染料兼容性 |
FAM, VIC, NED, ROX, Cy5, SYBR Green等 |
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光源类型 |
卤钨灯(7500)或白光LED(QuantStudio) |
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温控系统 |
控温范围 |
4°C - 99.9°C |
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升降温速率 |
快速模式:±2.2°C/s(7500 Fast) |
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控温精度 |
±0.25°C - ±0.5°C |
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通量与模块 |
反应板类型 |
96孔板、384孔板、OpenArray芯片(12K Flex) |
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反应体积范围 |
10-100 μL(标准),5-20 μL(快速/384孔) |
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运行时间 |
标准模式:约40分钟;快速模式:约30分钟 |
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软件与合规 |
软件平台 |
SDS Software, QuantStudio Design & Analysis Software |
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合规性 |
可选配21 CFR Part 11模块(安全、审计、电子签名) |
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远程监控 |
支持Wi-Fi连接、云平台数据访问(部分型号) |
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物理规格 |
尺寸(WxDxH) |
约 34 cm x 45 cm x 49 cm(7500 Fast) |
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重量 |
约 34 kg(7500 Fast) |
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电源要求 |
100-240 VAC, 50/60 Hz |
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文献和实验而生。 实时荧光定量 PCR 技术(Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction 简称 Real Time PCR)是在定性 PCR 技术基础上发展起来的核酸定量技术。 实时荧光定量 PCR 技术于 1996 年由美国 Applied biosystems 公司推出,在 PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个 PCR 进程,使每一个循环变得「可见」,最后通过 Ct 值和标准曲线对样品中的 DNA(or cDNA) 的起始浓度进行
miRNA实时荧光定量PCR 实时荧光定量PCR从1996年美国Applied Biosystems公司推出实时荧光定量PCR技术以来,该技术已经越来越广泛的应用到各类RNA的研究中,成为研究RNA必不可少的实验手段之一。目前比较常用的方法有两种:(1)TaqMan荧光探针法:该方法在特异性探针的两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当探针完整时,荧光基团发光被淬灭基团吸收;在PCR扩增过程中,探针被降解,荧光基团与淬灭基团分离,发出可被检测到的荧光,以此来监测整个
扩增曲线的分析攻略。 1、确认软件设置是否正确 对照试剂盒说明书,检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的设置问题是,需要看下所选用的试剂中是否含有 ROX 来作为参比荧光染料。Applied Biosystems™ 系列荧光定量 PCR 仪器可以用 ROX 来作为参比荧光染料,用以校正仪器系统以外的物理误差,比如均一化校正由于移液误差或者蒸发导致的批内体积误差等。目前市面上有的的荧光定量 PCR 预混液是不含有 ROX 的,当用此类试剂的时候,应该将 ROX 参比
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