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- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海抚生
- 库存:
20
- 灵敏度:
1.56ng/mL
- 样本:
血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本
- 标记物:
血清/血浆
- 适应物种:
大鼠、小鼠、人、植物
- 应用:
ELISA试剂盒
- 检测方法:
ELISA法
- 检测范围:
3.12ng/mL-200ng/mL
- 规格:
48T/96T
| 规格: | 48T | 产品价格: | ¥1500.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 96T | 产品价格: | ¥2200.0 |
商品属性:
| 产品名称 | 人糖抗原50(CA50)ELISA试剂盒 | 英文名称 | Human CA50 ELISA Kit |
| 灵敏度 | 1.56ng/mL | 检测范围 | 3.12ng/mL-200ng/mL |
| 产品货号 | A101213 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
检测原理:
通过特异性抗人CA50单克隆抗体包被于微孔板,与样本中的CA50结合形成固相抗体复合物。加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的检测抗体后,形成“捕获抗体-CA50-检测抗体”的三明治结构。经洗涤去除未结合物质,加入TMB底物显色,HRP催化TMB产生蓝色产物,在酸性终止液作用下变为黄色。颜色深浅与CA50含量成正比,酶标仪在506nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品浓度。
数据及参考曲线:
| 校准品浓度(ng/mL) | 200.00 | 100.00 | 50.00 | 25.00 | 12.50 | 6.25 | 3.13 | 0.00 |
| OD450/630值 | 2.661 | 1.602 | 0.870 | 0.486 | 0.328 | 0.163 | 0.094 | 0.015 |
| 校正OD值 | 2.645 | 1.587 | 0.854 | 0.471 | 0.312 | 0.148 | 0.078 | 0.000 |

实验原理:
该方法采用双抗体夹心ELISA技术:
微孔板预先包被特异性抗人CA50单克隆抗体(捕获抗体);
加入待测样本后,样本中的CA50与固相抗体结合;
随后加入生物素化或HRP标记的检测抗体,形成“捕获抗体–CA50–检测抗体”复合物;
洗涤后加入HRP标记的亲和素(若使用生物素-亲和素系统),再加入TMB底物显色;
HRP催化TMB生成蓝色产物,酸性终止液使其变为黄色;
在450 nm波长下测定吸光度(OD值),颜色深浅与CA50浓度呈正比,通过标准曲线计算浓度。
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实验步骤:

一、试剂准备
所有试剂使用前平衡至室温(18–25℃);
洗涤液按比例稀释(如10×稀释为1×);
标准品用稀释液复溶并进行倍比稀释(如0、0.5、1、2、4、8 ng/mL)。
二、加样
设立标准孔、样本孔和空白孔(仅加稀释液);
每孔加入50 μL标准品或待测样本;
可对血清/血浆样本进行1:2预稀释以减少基质干扰。
三、温育
封板后37℃温育60分钟,使抗原充分结合;
温育期间避免阳光直射。
四、洗涤
弃去孔内液体,每孔注入300–350 μL洗涤液;
静置30秒至1分钟,甩干,重复5次;
拍干微孔板,避免残留液滴影响后续反应。
五、加酶标抗体
每孔加入100 μL生物素化检测抗体;
37℃避光温育60分钟。
六、再次洗涤
同上法洗涤5次,确保彻底清除未结合抗体。
七、加HRP-亲和素
每孔加入100 μL HRP标记亲和素;
37℃避光温育30–60分钟。
八、第三次洗涤
再次洗涤5次,拍干。
九、显色
每孔加入显色剂A和B各50 μL(或TMB单组分90–100 μL);
37℃避光显色15–30分钟,观察颜色变化。
十、终止反应
每孔加入50 μL终止液,轻轻震荡混匀;
溶液颜色由蓝变黄,立即进行测定。
二一、读数与分析
使用酶标仪在450 nm波长下测定OD值;
以标准品浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘制标准曲线;
将样本OD值代入方程,计算TPS浓度。
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