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文献和实验1. 组织解离常用方法 组织解离主要依赖酶解法和机械分离法,或将两者结合以达到最佳效果 (1)酶解法(Enzymatic Digestion) 利用特异性蛋白酶水解构成组织结构的细胞外基质(ECM)和细胞间的连接蛋白,从而将细胞从组织微环境中释放出来。这是目前最主流且高效的解离方法。为防止死亡细胞释放的 DNA 导致细胞聚集,消化液中通常会添加 DNase I。 (2)机械分离法 (Mechanical Dissociation) 通过物理手段,如精细剪切、温和研磨、移液器吹打或自动化仪器震荡
取出所需分装管,并在规定时间内使用完毕,避免整管长时间暴露于室温。 4. 机械解离法 vs 酶解法 vs 组合法? 解离方法各有优缺点,根据不同组织类型和需求选择合适的解离方式。 (1)机械解离法:通过剪切、研磨、吹打等物理力破坏细胞间连接,无需酶试剂无需孵育时间成本较低,但是容易造成细胞损伤(如碎片多活率低)和解离不完全(如致密组织),常用于快速解离脾脏等柔软组织。 (2)酶解法:利用蛋白酶(胶原酶、胰酶、木瓜蛋白酶等)降解细胞外基质,温和解离保护细胞膜完整性,但是易破坏表位,且需要挑选合适
文献速递:个性化循环肿瘤 DNA 可成为免疫治疗疗效新型biomarker
。分别使用了AllPrep DNA/RNA/miRNA Universal Kit对外周血基因组DNA进行纯化, AllPrep DNA/RNA Mini Kit共同纯化肿瘤组织的DNA和RNA,以及AllPrep DNA/RNA FFPE Kit从解剖的FFPE组织中共同纯化DNA和RNA。所提取得到的核酸样本均满足下游NGS建库与检测对核酸质量的要求。 QIAGEN AllPrep系列试剂盒还可从同一样本中同步提取其他不同的生物分子组合,例如DNA/RNA、DNA/RNA/miRNA、DNA/RNA
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