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文献和实验对于 Taq 酶扩增性能更强。 1. 选择热启动酶降低非特异性扩增 在使用 Taq 酶进行扩增时,有时会出现非特异性扩增,可能的原因可以从模板、引物、体系、程序中一一排查。如模板是否被污染,引物特异性如何,Mg2+浓度偏高等等,其中一个不可忽视的原因是 DNA 聚合酶的种类是否合适。如果排查了其它原因仍旧有非特异性产物,可以选择热启动酶重新实验,即可有效减少或消除体系中其它产物的积累。常用的热启动酶分为两类:一类是化学法修饰的热启动酶,如 Ace Taq ,预变性 95℃5 - 10 min 即可
1 .嵌合抗体 嵌合抗体( chimeric atibody )是最早制备成功的基因工程抗体。它是由鼠源性抗体的 V 区基因与人抗体的 C 区基因拼接为嵌合基因,然后插入载体,转染骨髓瘤组织表达的抗体分子。因其减少了鼠源成分,从而降低了鼠源性抗体引起的不良反应,并有助于提高疗效。 2 .人源性抗体 是将人抗体的 CDR 代之以鼠源性单克隆抗体的 CDR ,由此形成的抗体,鼠源性只占极少,称为人源化抗体。 3 .完全人源化抗体 采用基因敲除术将小鼠 Ig 基因敲除,代之以
将其与抗体分子进行对接,发现了四个区域(图 6)可能是 SFTSV 病毒核衣壳蛋白的抗原表位;接着采用定点突变的方法对这四个区域进行了验证。 图3 实验思路示意图 图 4 抗原表位域预测结果,其中黄色部分为可能的抗原表面区域 案例分析二、利用分子模拟技术辅助鼠源抗体的人源化改造 [2] 多年的研究表明,鼠源性抗体在人体可诱发人抗鼠抗体反应,在临床应用一般效果不佳。研制人源化抗体
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