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文献和实验值。在上述条件下,以A410读数,以每分钟增加0.01O.D.值定义为一个酶活性单位(U)。 二、仪器与试剂 (1)样品: 多酚氧化酶粗酶液 硫酸铵沉淀组分 DE-52洗脱组分 葡聚糖凝胶洗脱组分 (2)底物: 邻苯二酚:O.01M邻苯二酚溶液 (3)反应体系: 0.2M邻酸二氢钠-0.1M柠檬酸缓冲液PH5.8 (4)器皿与仪器: 试管、恒温水浴等 分光光度计 三、酶蛋白的比活性 比活性=酶活单位(U)/mg蛋白质 四、实验结果与分析
一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中,没有活性;在细胞发生凋亡阶段,Caspase被激活,活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后,黄色
液( pH7.2);0.15mol/L儿茶酚溶液;10mmol/LTris-HCl溶 液(pH8.3);硫酸铵。 二、材料 梨 三、器材 组织匀浆机,漏斗,滤纸,分光光度计 。 四、操作方法 (1)多酚氧化酶(PP0)的提取 1. 丙酮粉制备:取果肉组织100 g,加入200mL冰丙酮(—20℃左右),用高速组织捣碎机匀浆5min,混合液用中速滤纸在漏斗架上过滤,残渣用冰丙酮反复冲洗,过滤,直至成为白色
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