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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
| 品牌 | 货号 | 产品中文名称 | 产品英文名称 |
|---|---|---|---|
| NEB | E5310 | OneTaq®RT-PCR 试剂盒 | OneTaq®RT-PCR Kit |
| 货号 | 产品中文名称 | 产品英文名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| E5310S | OneTaq® RT-PCR 试剂盒 | OneTaq® RT-PCR Kit | 30 rxns |
产品特点
Easy and efficient two-step RT-PCR
- Optimized reaction mixes for cDNA synthesis and PCR amplification
- Hot start formulation eliminates nonspecific amplification and does not require a separate activation step
- OneTaq® DNA Polymerase delivers robust amplification across a wide range of templates
OneTaq® RT-PCR 试剂盒含有两种强大的混合液:M-MuLV 酶混合液和 OneTaq 热启动 2X 预混液(提供标准缓冲液),可用于两步法的 RT-PCR 实验。这两种混合液可确保最快捷地建立反应,为 RT-PCR 反应提供优秀的重复性和稳定性。
使用两种优化的混合液:M-MuLV 酶混合液和 M-MuLV 反应混合液合成 cDNA 第一链。M-MuLV 酶混合液包含 M-MuLV 反转录酶和小鼠 RNase 抑制剂,M-MuLV 反应混合液包含 dNTP 和经优化的缓冲液。该试剂盒还包含两种优化的反转录引物与无核酸酶水。锚定的 Oligo-dT 引物 [d(T)23VN] 特异结合 polyA 尾的起始端完成退火。经优化的随机引物混合液能随机并持续性地与整个 RNA 模板配对,包括 mRNA 与无 polyA 尾的 RNA。
扩增步骤使用以预混液形式提供的 OneTaq 热启动 DNA 聚合酶。OneTaq 热启动 DNA 聚合酶可提供比 Taq 更高的保真度和更好的扩增效率。可制备高达 6 kb 的 RT-PCR 产物(图 1)。
42℃ 条件下,使用 1X M-MuLV 酶混合液,以 0.5 μg 人脾脏总 RNA 为模板合成 cDNA 第一链,泳道 1、4 和 7 中加入 dT23VN,泳道 2、5 和 8 中加入随机 6 碱基引物混合液。泳道 3、6 和 9 为 No-RT 阴性对照。使用 OneTaq 热启动 1X 预混液,35 个循环扩增 1.5 kb 的 β 肌动蛋白基因片段、0.6 kb 的 GAPDH 基因片段和 5.5 kb 的 p532 基因片段。Marker(M)为 1 kb Plus DNA Ladder(NEB #N3200)。 图 2:cDNA 第一链合成
- 产品类别:
- RT-PCR 产品,
- cDNA 合成和反转录酶产品
- 应用:
- RT-PCR,
- RT-PCR & cDNA Synthesis,
- Multiplex PCR,
- Specialty PCR, PCR
备注:以上仅为 E5310 的部分产品信息,如需NEB货号 E5310 的完整产品信息及相关的实验操作手册等等,请通过NEB官网查找对应的货号获取。
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文献和实验pg的总HeLa RNA,和如图所示的看家基因引物对在50℃进行cDNA反应。使用Platinum® PCR SuperMix.以1min/kb进行PCR反应。使用SuperScript™III First-Strand Synthesis System进行RT-PCR合成cDNA作为对照反应。 方便的室温稳定(Room Temperature Stable RTS) 试剂 SuperScript™ III RTS(室温稳定Room
限度酶克隆 )。不需在PCR 扩增产物上加接头,即可直接进行克隆 。 图32 The TA Cloning® Concept Topo TA克隆 方法(Topo TA Cloning Kit
to the amount of probe cleavage 上一篇:RT-PCR简介 下一篇:M-MLV第一链cDNA合成试剂盒-技术手册
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