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- NEB
- M0466
- 2026年04月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
| 品牌 | 货号 | 产品中文名称 | 产品英文名称 |
|---|---|---|---|
| NEB | M0466 | 模板置换反转录酶混合液 | Template Switching RT Enzyme Mix |
| 货号 | 产品中文名称 | 产品英文名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| M0466L | 模板置换反转录酶混合液 | Template Switching RT Enzyme Mix | 100 rxns |
| M0466S | 模板置换反转录酶混合液 | Template Switching RT Enzyme Mix | 20 rxns |
产品特点
模板置换反转录酶和其相应的反应缓冲液能够在反转录反应中有效地实现模板置换。混合液中含有独特的反转录酶和小鼠 RNase 抑制剂。与竞争对手的反转录酶产品不同，NEB 的产品不需要添加任何添加剂（如 PEG 或甜菜碱）来优化性能，从而简化了反应建立流程。与模板置换寡核苷酸（TSO）搭配使用， 合成的 cDNA 3’端可以选择性地加入已知序列。由此获得的 cDNA 可进行 PCR 扩增，也可作为 5’RACE（ cDNA 末端快速扩增）或第二链 cDNA 合成的模板。
- 以极低起始量模板（单细胞/细胞核或 2 pg 总 RNA）制备 RNA-seq 文库
- 以最低起始量为 10 ng 的总 RNA 进行 5'RACE
- 降低 RNA-seq 或 5'RACE 的背景
- 该酶混合液包含小鼠 RNase 抑制剂，不需要额外添加
- 兼容各种模板置换寡核苷酸（TSOs）、反转录引物和 DNA 聚合酶,用于扩增全长 cDNA
- 与其他的 RNA-seq 方法（例如:Smart-Seq®）相比，操作更快捷
模板置换反转录酶混合液中的反转录酶（RT）在其到达 RNA 模板的 5'末端后会添加几个非模板源的核苷酸。这几个非模板源的核苷酸可以与已知序列的模板置换寡核苷酸（TSO）退火，促使反转录酶从 RNA 模板上切换到 TSO 上。得到的 cDNA 含有 3'末端添加有已知序列（TSO 的互补序列）。该特征可用于多种下游应用，例如 cDNA 扩增、5'RACE（cDNA 末端快速扩增）和第二链 cDNA 合成。说明书中有优化的实验流程。
备注：以上仅为 M0466 的部分产品信息，如需NEB货号 M0466 的完整产品信息及相关的实验操作手册等等，请通过NEB官网查找对应的货号获取。
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文献和实验scFvJH4-5XhoF（）R引物：5,-GAG TCA TTC TCG TCT CGA GAC GGT GAC CAG GGT TCC-3' ● scFvJH6XhoFOR引物： 5'-GAG TCA TTC TCG TCT CGA GAC GGT GAC CGT GGT GCC-3' ● XhoI限制性酶（NEB） 以及厂家的2号缓冲液（NEB2） ● VL基囚文库载体 [方法] 1. 配制50ul PCR反应混合液， 包含： ● 水，34.5ul ● 20
10XVent聚合酶缓冲液，5.0ul ● FdSEQl引物 （10pmol/u1），2.5ul ● 反向引物（10pmol/u1），2.5ul ● 单链scFv模板DNA（10ng），1.0ul● Vent DNA聚合酶（2单位），1.0ul 2. 在有加热盖的热循环仪内加热反应混合液到94℃5分钟。 3. 以94℃30秒、42℃30秒、72℃1分钟的条件共循环25次，扩增VL基因。 4. 用Wizard PCR纯化试剂盒纯化PCR产物。 5. 用XhoI和NotI消化
用于连接scFv和pHENl DNA以及将scFv文库电转化到大肠杆菌的试剂和设备 ● 来自3个VH基因片段噬菌体文库的质粒DNA [方法] 1. 配制50ul PCR反应混合液，包含： ● 水，34.5ul ● 20×dNTP（每种5mmol/L）。 2.5ul ● 10×Vent聚合酶缓冲液，5.0ul ● FdSEQl引物（10pmol/u1），2.5ul ● scFvVLBACK引物（1opmol/u1），2.5/ul ● scFv模板DNA（50
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