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RIPA裂解液(强)

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  • ¥280
  • 兰博利德(LABLEAD)已认证
  • R1091
  • 北京
  • 2026年02月27日
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      1000

    • CAS号

      -

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      兰博利德

    • 保存条件

      -20保存

    • 规格

      100ml

    保存条件:   -20℃。保质期1年

     

    产品简介: 

        RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
        RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4),150mM NaCl,1%的triton ,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS,以及sodium orthovanadate,EDTA,leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。

        产品中包含一支1mL的PMSF(浓度100mM),无需自备。

     

    注意事项:     

     1、 为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
      2、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

     

    使用说明: 

     

    对于培养细胞样品:  

    1. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。

    2. 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。

    对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。

    3. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

     

     

    裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。 

     

    对于组织样品:

    1. 把组织剪切成细小的碎片。

    2. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。

    3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高

    浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)

    4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

    5. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

    6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

     

    注:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。

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