SMARTer Stranded Total RNA-Seq

SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 - Pico Input Mammalian设计用于从皮克级总RNA(250 pg–10 ng)中高效制备Illumina测序文库。本试剂中采用的技术适用于高品质，部分降解及低品质RNA（如来自于FFPE或LCM样品）。本试剂是一体化操作流程，保留了链来源信息，并且不需要下游文库制备，在反转录和PCR扩增过程中就可以添加indexes和接头。升级产品与原有SMARTer 皮克级产品相比，提升了在所有Illumina测序平台的测序性能，并且文库纯化操作更加方便。

核糖体RNA在总RNA中占有很高的比重（~90%）。在制备文库前从总RNA中去除掉这些大量的RNA，有利于降低测序成本，提高统计数据的比对比率。但是在以微量样品起始时，如果一开始就从总RNA中去除rRNA，会造成纯化后的起始样品太少而不能制备高品质测序文库，本试剂采用专有的特异针对哺乳动物rRNA和部分线粒体RNA的探针去除核糖体cDNA（来源于核糖体RNA的cDNA片段）。采用本试剂制备的文库与前代试剂制备的文库接头配置不同，即使是使用基于双通道SBS技术的Illumina平台如NextSeq， MiniSeq， 和 HiSeq 3000/4000测序时，不需要添加大量PhiX也可以获得高比例的簇通过过滤百分比(%PF)。每个run可以获得更多的生物学相关测序reads，这又反过来减少了测序成本。采用Pico v2 Kit同样可以获得更多的特异转录本，更低的rRNA、mtRNA比对率和重复率。此外，Pico v2 Kit包含了一种新的PCR buffer，提高了文库纯化效率。

试剂盒提供12，48，96和192次反应规格。高通量版本试剂 (Code No. 634413,634414) 包含12种反向引物，8种正向引物，最多可以构建96种indexes文库。包括文库构建及纯化的整体流程只需~6 h。

不同样品起始量解决方案：

· 10-100 ng 总RNA, 推荐使用 SMARTer Stranded Total RNA Sample Prep Kit - Low Input Mammalian

· 100 ng-1 μg总RNA, 推荐使用SMARTer Stranded Total RNA Sample Prep Kit - HI Mammalian

图1. SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 - Pico Input Mammalian技术流程