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- 2026年02月22日
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北京柏瑞图科技有限公司
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ABN-U0487-1mL
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文献和实验克隆成功与否,除与连接方式以及载体选择有关外,载体的处理也是一个重要环节。为了提高连接效率,处理载体时应注意以下几点:(1)应加入常用量5~10倍的内切酶水解载体,以保证载体被完全酶切;(2)如用双酶切割载体,则必须电泳回收载体片段,除去双酶切所产生的小DNA片段;�(3)如粘端连接,单酶切处理过的载体必须用碱性磷酸酶(如牛小肠碱性磷酸酶,CIP)处理,防止载体自身环化。CIP可以水解掉DNA5末端的磷酸。对于3末端突出的DNA(如〖WT5BX〗Pst〖WT5BZ〗I水解,需用10倍于5末端
,Zhang R,Ito Y.J.Chromatogr.A,1998,829(1-2):137～141［26］Yang F-Q,Zhang T-Y,Mo B-X,Yang L-J,Gao Y-Q,Ito Y.J.Liq.Chrom.& Rel.Technol.,1997,790(1-2):17～30［27］Ma Y,Ito Y.Anal.Chim.Acta,1997,352:411～427［28］Rasooly A,Ito Y.J.Liq.Chrom.& Rel.Technol.,1998,21(1-2
the pH or the chromatographic material used for peptide purification (27, 110, 116). (i) Phosphopeptide sequencing by MS/MS. In our laboratory, we have found that a combination of HPLC, Edman degradation, and phosphopeptide sequencing
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