Biomatik 甲醇 Methanol(A4160)

甲醇酵母系统表达的影响因素

在甲醇限制性培养基上生长缓慢(methanol utilization slow , MutＳ或Mut-)，它们只能利用弱的aox2基因启动合成aox2基因启动合成AOX；而aox1基因完整的酵母则生长正常(Mut＋)。原则上，如果是胞内表达，应尽量用Mut－细胞，这样得到的蛋白产物中醇氧化酶蛋白量较少而目的蛋白量相对较多(约占Pp总分泌蛋白量的30-90%，如人乙酰胆碱酯酶B变异链的含量占到90%，使下游纯化更易进行。当诱导AOX1时，转化子不能同时高水平产生酒精氧化酶和外源蛋白，与野生型Mut＋

甲醇酵母表达常用溶液及缓冲液的配制

除菌。10*D：（20%Dextrose 葡萄糖）保存期为1年。200g葡萄糖溶于1000ml水中，灭菌15min或过滤除菌。10*M：（5%Methanol 甲醇） 保存期为2个月。将5ml的甲醇与95ml水混匀，过滤除菌。10*GY：（10%Glycerol 甘油） 保存期为1年以上。将100ml甘油和900ml水混匀后，高压灭菌或过滤除菌。100*AA：（0.5% of each Amino Acid，各种氨基酸） 4℃保存 保存期为1年。分别将500mg的L-谷氨酸、L-蛋氨酸、L-

【求助】western 转膜 mark转不上

没有SDS? zhanghai123 还有1g SDS aileen83 我做western的转膜缓冲液：Tris:3g, Glycine:14.4g,methanol: 200ml. 共1000ml 不知道是否能对你有用 haodanzhang 配制转膜液时，甲醇不宜过早加入。个人认为不用加SDS，因为加入SDS后会有气泡产生。转膜条件我的一般是：300mA, 2h,效果