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50管/24样
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文献和实验基于MS强度或计数的数据依赖法非标记定量蛋白质组学的蛋白质互作分析(一)
本期要介绍到的是基于MS强度或计数的数据依赖法非标记定量蛋白质组学的蛋白质互作分析。 在试验中使用不同的同位素标记(某些情况下等压标记)是一种行之有效的肽和蛋白质定量方法。通常,分析之前,标记样品和未标记样品是混合在一起的,这时可以通过测量相应的峰值强度来直接确定化合物比率。标记大致可以分成这些共价附着在肽上的标记,包括同位素编码的亲和标签、ICAT或iTRAQ、通过酶反应合成(例如通过胰蛋白酶合成18O)或通过代谢合成(例如在细胞培养中用氨基酸标记稳定同位素)、SILAC等。在蛋白质互作
同时测定OD260nm,与OD280nm。,然后根据两种波长的吸收度的比值,通过经验公式校正,以消除核酸的影响而推算出蛋白质的真实含量。本法操作简便迅速,且不消耗样品(可以回收),多用于纯化之蛋白质的微量测定。主要缺点:当待测的蛋白质与标准蛋白质中的酪氨酸和色氨酸含量差异较大时,则产生—定误差,混有核酸时必须分别测定280nm和260nm两处的OD值,再按公式推算蛋白质含量。[操作]取试管7支,各管混匀,盛于石英杯中,用紫外分光光度计,以空白管调节零点,分别于280nm、260nm波长下测定各管光密
【目的要求】 1. 掌握比色分析法和分光光度法基本原理、标准曲线的制作及使用,标准管法结果计算 2. 熟悉蛋白质含量测定常用方法、原理及应用 3. 了解常用可见光、紫外分光光度计 的测定原理及使用 【教学内容】 1. 酚试剂法蛋白质含量测定 Lambert-Beer定律,比色分析法和分光光度法基本原理, 722型分光光度计使用,常用蛋白质含量测定方法及应用,酚试剂法测定蛋白质含量原理、操作, 标准曲线的制备及使用 2. 双缩脲法蛋白质含量测定
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