- ￥1199 - 9129
- NEB
- M0544
- 2026年03月25日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
江苏康成百澳
- 规格：
50 reactions-500 reactions
NEBNext Ultra II Q5® 预混液是 Q5 DNA 聚合酶的zui新版本，针对二代测序（NGS）文库扩增的稳定性和保真性做了全面优化。此新剂型进一步提高了文库扩增的一致性，即使在 GC 富集区域依然表现优异。
该预混液的酶是 Q5 超保真聚合酶，它是一个非常新颖的热稳定的 DNA 聚合酶，具有 3´→5´ 核酸外切酶活性，并且融合了具有持续合成能力强的 Sso7d DNA 结合域。Q5 还具有zui优异的保真度（比 Taq DNA 聚合酶高 280 倍），错配率极低。
NEBNext Ultra II Q5 预混液是一种基于适体的热启动剂型，可实现方便的室温下建立反应体系。方便的 2X 预混液包含 dNTP、Mg++ 以及专利缓冲液，仅需加入引物和 DNA 模板，即可进行稳定高效的扩增。所有 NEBNext Ultra II 文库制备试剂盒中均包含 NEBNext Ultra II Q5 预混液，用于 DNA 和 RNA 的建库。
文库使用人 NA19240 基因组 DNA 为样本制备。其中一个文库不进行扩增。另外两个文库分别使用 NEBNext Q5 热启动超保真 PCR 预混液（NEB #M0543）或使用 NEBNext Ultra II Q5 预混液（NEB #M0544）进行 5 个循环的 PCR 扩增。文库使用 Illumina® NextSeq® 500 平台进行测序。从数据中随机选出 4.2 亿个 75 bp reads，平均覆盖度为 10X。使用 Bowtie 2.2.4 将 reads 与 GRCh37 参考基因进行比对。每个区域的 reads 使用 bedtools v2.19.1 进行计数。A：图中显示了每个文库覆盖到人类基因组中低覆盖区域（1）的 reads 数。B：随机选出的 4.2 亿个 75 bp reads 中，预期覆盖度为 10X。图中显示了难检测区域覆盖度 > 10X 的百分比。NEBNext Ultra II Q5 预混液大大提高了对已知低覆盖度区域的覆盖度（无遗漏信息），且与未进行扩增的文库显示了相似的覆盖度。
Ultra II 可在难检测序列区域实现zui高且zui均一的覆盖度。
按照生产商推荐的方法，使用 PCR-free 方法或所示的文库制备试剂盒，以 100 ng 人 NA19240 基因组 DNA 为样本制备文库。使用 NEBNext Ultra II 制备 PCR-free 文库。文库使用 Illumina NextSeq® 500 平台进行测序。从数据中随机选出 4.2 亿个 reads，平均覆盖度为 10X。使用 Bowtie 2.2.4 将 reads 与 GRCh37 参考基因进行比对。每个区域的 reads 使用 bedtools v2.19.1 进行计数。图中显示了每个文库覆盖到人类基因组中低覆盖区域（1）的 reads 数。Ultra II 可在这些难检测区域实现zui高且zui均一的覆盖度，让覆盖度更接近使用 PCR-free 方法所获得的覆盖度。
使用 NEBNext Ultra II Q5 预混液对不同 GC 含量的微生物基因组 DNA 进行扩增，可获得均一的覆盖度。
以所示的 100 ng 基因组 DNA 为样本，使用 NEBNext Ultra II DNA 文库制备试剂盒进行文库制备。使用 NEBNext Ultra II Q5 预混液模块进行扩增，并在 Illumina MiSeq 平台进行测序。使用 Picard’s CollectGCBiasMetrics（v1.117）计算 GC 覆盖度。预期的标准化覆盖度 1.0 以灰色水平线表示，不同 GC 含量（%）的 100 bp 区域的数量以垂直的灰色柱形图显示，彩色折线显示每个文库标准化后的覆盖度。无论 GC 含量多少，NEBNext Ultra II Q5 预混液都能获得均一的 GC 覆盖度。
来源
大肠杆菌菌株，携带 Q5 超保真 DNA 聚合酶基因。
反应条件
NEBNext Ultra II Q5 预混液、 DNA 模板和 1 μM 引物，总反应体积为 50 μl。
- 产品类别:
- Illumina DNA 文库制备,
- Analysis of DNA Methylation by Bisulfite Conversion,
- NEBNext® NGS 文库制备产品的自动化,
- 应用:
- PCR
-
本产品提供以下试剂或组分：
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，而这种"限制"病毒生存的办法则可归功于细胞内部可摧毁外源DNA的限制性内切酶。首批被发现的限制性内切酶包括来源于大肠杆菌的EcoR I和EcoR II，以及来源于Haemophilus influenzae的Hind II和Hind III。这些酶可在特定位点切开DNA，产生可体外连接的基因片段。研究者很快发现内切酶是研究基因组成、功能及表达非常有用的工具。 当限制性内切酶的应用在上世纪七十年代流传开来的时候，以NEB为代表的许多公司开始寻找更多的限制性内切酶。除了某些病毒以外，限制
.6)。 ( 4 ) 10% 过硫酸铵（APS) 水溶液。 ( 5 ) 四甲基二乙胺（TEMED)。 ( 6 ) 去离子甲酰胺。 ( 7 ) 固定分子质量大小的寡核苷酸，作为分子质量标准或短距离 DNA 标尺，如 100 个碱基梯度标尺（NEB 公司）。 ( 8 ) 6X 溴酚蓝上样缓冲液：70% (m/V) 的蔗糖溶液中加 0.25% (m/V) 的溴酚蓝。 ( 9 ) 溴化乙锭溶液：5 mg/ml EB 水溶液。 2.5 片段纯化 2.5.1 哌啶切割后的直接纯化
) 。 ( 4 ) 第一向电泳缓冲液：0.5% 固相 pH 梯度（IPG ) 缓冲液 4~7 ( V/V ) ，0.002% ( m/V ) 溴酚蓝。 ( 5 ) 还原溶液：50 mmol/L Tris-HCl ( pH 8.8)，6 mol/L 尿素，30% ( V/V ) 甘油，2%（m/V）十二烷基硫酸钠（SDS) ，130 mmol/L 二硫苏糖醇（DTT) ( 见注释 1)。 ( 6 ) 烷基化溶液：50 mmol/L Tris-HCl ( pH 8.8 ) ，6 mol/L 尿素，30
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