十二烷基硫酸锂

十二烷基硫酸钠―聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS―PAGE)

十二烷基硫酸钠―聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS ― PAGE) 第二相聚丙烯胺 胺凝胶的选择主要取决于需要分离蛋白质的相对分子质量的范围，这与单相的聚丙烯酰胺凝胶电泳的选择是相同的。当蛋白质相对分子质量在15 000～200 000时，电泳迁移率与相对分子质量的对数呈线性关系。SDS―PAGE不仅可分离蛋白质，且可在一定范围内粗略测定蛋白质的相对分子质量。其主要步骤如下。 (1)凝胶配制及灌胶：胶浓度越高，所分离蛋白质的相对分子质量范围也越大。薄的胶，其染色和脱色快，且背景

SDS-PAGE电泳时电泳条带不规则等几点问题

的原因是：sample loading buffer中没有足够量的甘油；或梳子安放不合适，使得加样孔底部留有聚合的丙烯酰胺。 7). 制样过程中，如果样品混合物变为黄色，说明溶液太酸，应加入NaOH调至蓝色，否则样品在电泳时会出现反常迁移。 8). 如果在4℃进行电泳，可以用十二烷基硫酸锂（LiDS）替代SDS，低温下LiDS不会沉淀。 9). 蛋白质条带的清晰与否取决于SDS的级别和品牌。 10). 丙烯酰胺有剧毒，可导致中枢

Folin-酚（福林酚）试剂配方

在2升磨口回流瓶中，加入100克钨酸钠（Na2WO4•2H2O）,25克钼酸钠（Na2MoO4•2H2O）及700毫升蒸馏水，再加50毫升85%磷酸，100毫升浓盐酸，充分混合，接上回流管，以小火回流10小时，回流结束时，加入150克硫酸锂（Li2SO4），50毫升蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15分钟，以便驱除过量的溴。冷却后溶液呈黄色（如仍呈绿色，须再重复滴加液体溴的步骤）。稀释至1升