羟自由基清除能力测定试剂盒

羟自由基清除能力测定试剂盒

分光光度法50管/48样

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损，进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。

测定原理

H₂O₂/ Fe²⁺ 通过Fenton反应产生羟自由基，将邻二氮菲- Fe²⁺水溶液中Fe²⁺氧化为Fe³⁺ ，导致536nm吸光度下降，样品对536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由基的能力。

自备实验用品

可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：液体50 mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体16mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体8 mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体16mL×1瓶，4℃保存。

试剂四：液体9mL×1瓶，4℃保存。   

分类要点：

1. 酶活性检测：基于酶催化底物生成产物的速率定量；

2. 代谢物检测：通过特异性反应显色定量；

3. 免疫类（ELISA）：双抗体夹心法形成三明治结构显色。

适用：动植物组织、微生物等样本精准检测。

试剂组成

注：部分试剂盒还包含酶标板、比色杯等耗材

 

储存与稳定性（以说明书为准）

常规储存：2-8℃冷藏，避免反复冻融

特殊要求：部分酶类或抗体试剂需-20℃冷冻保存

有效期：未开封通常12个月，开封后建议在规定时间内用完

结果计算

按标准曲线计算：含量=（测定管吸光值-空白值）÷（标准管吸光值-空白值）×标准品浓度÷样本量

所需仪器（自备）

分光光度计/酶标仪、离心机、水浴锅/金属浴、移液器、反应容器等

 

步骤阶段	核心操作内容	关键注意事项
操作前准备	1. 试剂室温平衡 15-30 分钟，检查外观 2. 样本预处理（离心 / 稀释） 3. 校准仪器，准备耗材	试剂勿反复冻融；避免溶血样本；仪器需校准
试剂配制	1. 单试剂直接摇匀；双试剂按比例配制 2. 梯度稀释标准品，复溶质控品	现配现用；禁止混用不同批次试剂
反应体系构建	1. 按空白→标准品→质控品→样本顺序加样，设复孔 2. 恒温孵育，按需加终止液	严控加样量；孵育温度 / 时间不更改；终止液沿壁加
信号检测	比色法读 OD 值；荧光 / 化学发光法按对应波长读数	擦拭比色杯；荧光检测需避光
数据分析判定	1. 绘制标准曲线（r≥0.99） 2. 计算样本浓度，超范围稀释重测 3. 验证质控结果	拟合方式遵说明书；浓度计算需乘稀释倍数
收尾与废弃物处理	理台面，试剂规范储存；分类处理生物废弃物	试剂做好开封记录；废弃物按生物安全要求处理

关键注意事项

试剂使用前充分混匀，按要求储存，避免反复冻融

严格控制反应温度和时间，确保操作规范

样本需新鲜，避免溶血、污染，采集后及时检测

操作时佩戴防护用品，废液按规范处理

生化试剂盒的保存条件

生化试剂盒的保存需严格遵循说明书要求，核心原则是按组分类型分类保存、避免反复冻融、控制温度波动，具体条件如下：

通用保存温度分类

1. • 2~8℃冷藏保存：适用于多数常规试剂组分，如缓冲液、底物液（非酶类）、稀释液、显色剂等。这类试剂对温度相对不敏感，冷藏可维持其化学稳定性，避免室温下成分降解。

   • -20℃冷冻保存：适用于酶类试剂（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶）、标准品、质控品、抗体 / 抗原等生物活性成分。冷冻可抑制酶活性衰减和蛋白降解，需注意分装为小体积，防止反复冻融导致活性丧失。

   • -80℃超低温保存：针对特殊敏感组分（如 RNA 酶抑制剂、高活性蛋白、稀有标准品），长期保存需超低温环境，降低分子运动速率，延长保质期。

   • 室温保存（15~25℃）：仅限部分稳定性极高的组分，如干燥剂、终止液（强酸 / 强碱类）、固体试剂等，需密封置于阴凉干燥处，避免潮湿和阳光直射。

     关键保存注意事项

2. • 避免反复冻融：冷冻试剂首次解冻后，建议按需分装成若干小份，后续使用时仅解冻所需量，反复冻融会破坏蛋白和酶的空间结构，导致活性下降。

   • 避光保存：显色剂、荧光底物、酶标记物等对光照敏感，需用棕色瓶或锡箔纸包裹容器，防止光照引发氧化反应，影响试剂性能。

   • 密封防污染：所有试剂瓶需拧紧瓶盖，防止挥发、渗漏或微生物污染；开封后建议标注开封日期，优先使用。

   • 温度稳定性控制：转运或取放试剂时，需使用冰袋或低温保温箱，缩短室温暴露时间（＜30 min）；避免将试剂置于冰箱冷冻室与冷藏室交界处，防止温度反复波动。

   • 特殊组分单独保存：部分试剂盒含易挥发（如有机溶剂）、易潮解组分，需单独密封存放，必要时放置干燥剂。

 

 

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