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- DM-SOIL1052
- 上海
- 2026年02月03日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
999
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海笃玛生物科技有限公司
- 保存条件：
-20°
- 规格：
50管/24样
土壤几丁质酶（Soil Chitinase，S-Chitinase）试剂盒
分光光度法50管/24样
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。
测定原理
几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基ben甲醛产生红色化合物，在585nm处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
自备实验用品及仪器
天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿，甲ben、蒸馏水。
试剂组成和配制
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体4mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体50mL×1瓶，4℃避光保存。
生化试剂盒的通用测定步骤可分为 前期准备、试剂配制、参数设置、校准与质控、样本检测、结果计算 六大核心环节，具体细节如下：
一、前期准备
1. 试剂准备：检查试剂盒各组分（R1、R2、校准品、质控品等）是否齐全、无异常（如浑浊、沉淀、变色），按要求从储存环境取出，平衡至室温（通常 20~25℃，平衡时间 5~30 分钟，具体以试剂盒说明为准），轻轻摇匀备用。
2. 样本准备：确认待检测样本类型符合要求，已按规范完成采集与处理（如血清 / 血浆样本离心分离、组织匀浆制备、尿液离心去沉淀等）；若样本需稀释或预处理（如去除干扰物），提前完成相关操作。
3. 仪器准备：确认使用的生化分析仪 / 酶标仪等仪器符合试剂盒适用要求，提前开机预热，进行仪器清洁（避免残留污染），准备好所需耗材（如反应杯、移液枪头）。
二、试剂配制（如适用）
1. 即用型试剂：无需额外配制，平衡至室温后直接使用。
2. 需混合试剂：按试剂盒规定比例（如 R1:R2=4:1、3:1 等）准确混合试剂组分，现配现用，避免提前配制导致试剂失效。
3. 校准品配制：用指定稀释液（如试剂盒配套稀释液、生理盐水）将校准品稀释至所需浓度梯度（通常 3~5 个梯度，如 0、20、40、80、160 nmol/L），稀释后充分摇匀备用。
三、仪器参数设置
根据试剂盒要求及所用仪器型号，设置核心检测参数：
1. 基础参数：检测方法（终点法、速率法、两点法等）、孵育温度（通常 37℃）、反应时间（含孵育时间和检测时间）。
2. 波长参数：主检测波长（如 450 nm、540 nm，根据反应产物特征吸收峰确定），若存在背景干扰，需设置副波长进行校正。
3. 液量参数：明确试剂与样本的比例（如 R1 200 μL + 样本 20 μL，孵育后加 R2 50 μL），确保移液体积准确。
四、校准与质量控制（保障结果准确性）
1. 校准程序：将配制好的各浓度梯度校准品依次加入反应杯，按设置的参数进行检测，记录各校准品的吸光度值 / 吸光度变化率；以校准品浓度为横坐标（X 轴）、对应吸光度相关值为纵坐标（Y 轴），采用指定拟合方式（如线性回归、Spline 拟合）绘制标准曲线，要求相关系数 R²≥0.990（具体以试剂盒性能指标为准）。
2. 质控程序：同步测定高、中、低三个水平的质控品，检测完成后查看质控结果是否在规定靶值范围内；若超出范围，需排查试剂、仪器、操作等环节问题，解决后重新进行校准与质控。
五、样本检测
1. 按仪器参数设定的试剂 / 样本比例，依次向反应杯加入对应试剂和待检测样本，确保加样顺序正确（如先加 R1 和样本，孵育后再加 R2）。
2. 按规定的孵育温度和时间完成反应，避免反应不充分或过度反应。
3. 反应结束后，仪器自动读取各样本的吸光度值 / 吸光度变化率，记录原始数据。
六、结果计算与记录
1. 依据绘制好的标准曲线，结合样本的吸光度相关值，自动或手动计算样本中被测物的浓度 / 活性（如公式：被测物浓度 =（样本吸光度值 - 空白吸光度值）× 校准品浓度 /（校准品吸光度值 - 空白吸光度值））。
2. 记录检测结果，同时标注校准曲线相关系数、质控结果等关键信息，便于后续结果追溯与验证。
注意事项：
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文献和实验问：很多生物防治用的真菌可以产生几丁质酶和蛋白酶等代谢产物，现在实验想检测这两种酶的活性的大小，不知道用那种方法，请教各位！有没有简单的方法如平板法，测代谢产物法等，具体方法如何？ 答：可以用透明圈法，具体做法就是提出几丁质粗酶液后在几丁质—PDA培养基上打孔培养一定时间然后观察透明圈的大小，测代谢产物应该是不行，因为几丁质酶分内外切酶，产物不一，测不出来的，你也可以用聚丙烯酰胺电泳检测。具体方法可以参考这篇文章Chitinase system of Bacillus circulans
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