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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
现货
- 供应商:
柏莱源(天津)生物科技有限公司
- 英文名:
Puromycin Dihydrochloride
- 规格:
10mg/ml×1ml/10mg/ml×5ml/250mg
| 规格: | 10mg/ml×1ml | 产品价格: | ¥166.4 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 10mg/ml×5ml | 产品价格: | ¥694.4 |
| 规格: | 250mg | 产品价格: | ¥2638.4 |
产品简介:
Puromycin是来源于Streptomyces alboniger的一种氨基核苷类抗生素,中文名为嘌呤霉素,常用于筛选通过质粒转染/转
化、病毒感染等方法能表达pac基因(puror)的真核或原核多克隆或单克隆细胞。Puromycin不仅用于稳定细胞株的筛选,也用于稳定细胞株的维持。本产品的10mg/ml包装经过滤除菌,可以直接用于细胞培养。
保存条件:
-20℃保存,至少一年有效。10mg/ml包装避免反复冻融。
使用说明:
1. 推荐工作浓度:推荐的作用于哺乳动物细胞的嘌呤霉素浓度一般为1-10μg/ml,但最佳工作浓度需要通过剂量反应曲线来确定。
2. 嘌呤霉素剂量反应曲线的确定(以shRNA转染或者慢病毒感染为例)
嘌呤霉素的有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢及细胞所处细胞周期等因素相关。为了筛选到稳定表达的shRNA或感染病毒的细胞株,确定杀死未转染/感染细胞的最低浓度嘌呤霉素非常重要。对于初次使用的细胞,一般需要通过实验来确定适合自身实验体系的剂量反应曲线(dose-response curve or kill curve)。
a. 第一天:24孔板中以5~8×104cells/孔的密度接种细胞,接种够量的孔以便进行后续的剂量梯度实验。细胞培养箱内培养过夜。
b. 第二天:在培养过夜后的细胞中更换新鲜配制的筛选培养基,该筛选培养基为含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0、1、2.5、5、7.5、10μg/ml等),更换培养基后在细胞培养箱中继续培养。
c. 第三天后:由于嘌呤霉素可以快速作用于细胞,一般2天内可以杀死99%的未表达pac基因的细胞,所以在加嘌呤霉素后的1-2天就可以进行观察细胞存活率,从而确定有效杀死正常细胞的药物最低浓度。如果细胞耐药性比较强,需要每日观察,一般4-10天内即可确定嘌呤霉素的最低浓度。
3. 哺乳动物稳定表达细胞株的筛选
转染含有pac基因的质粒或者感染含有该基因的病毒后,即可筛选稳定表达株。
a. 细胞转染或感染48小时后,将细胞置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养,此为处理组。
注意:当细胞处于分裂活跃期时,抗生素作用最明显。细胞过于密集,抗生素产生的效力会明显下降,所以细胞的密度最好不超过25%。建议同时做一个正常细胞的对照组。转染或感染48小时后,如果细胞过密也可以消化后重新接种细胞,培养过夜后即可进行嘌呤霉素筛选。
b. 每隔2-3天,更换含有嘌呤霉素的培养基。
c. 筛选7天后,对照组正常细胞应该100%死亡,处理组中存活的细胞为表达pac基因的细胞。然后根据实验目的进行多克隆或单克隆细胞的筛选。
注意:每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要24小时,有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在2-10天。
d. 待细胞可以稳定生长后,嘌呤霉素的浓度可以减半用于后续的培养。在得到稳定表达细胞株后,一般建议嘌呤霉素也须持续加入,并2-3天更换含有嘌呤霉素的新鲜培养液。
注意事项:
本产品对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 |
| ST551-10mg | Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) | 10mg/ml×1ml |
| ST551-50mg | Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) | 10mg/ml×5ml |
| ST551-250mg | Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) | 250mg |
Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素)代理:柏莱源(天津)生物科技有限公司
我司代理品牌及优势品牌包含但不限于:sigma、Thermo Fisher、Goldbio、Qiagen、Abcam、ATCC、ECACC、Polysciences、艾本德、天根、Takara、B&D、BIOFLUX、biolegend、R-Biopharm等。
柏莱源(天津)生物科技有限公司主要从事分子生物学、细胞生物学及免疫学实验相关试剂及耗材的销售,包括核酸提取、PCR产品、血清、细胞培养耗材等产品。
Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素)代理:柏莱源(天津)生物科技有限公司,更多碧云天产品资讯,请联系我们哦!
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由白黑链霉菌( Streptomyces alboniger)的培养滤液中获得的抗菌素,除对所有细菌具抗性外,还具有抗肿瘤活性。由于其结构与 tRNA的末端结构类似,故能抑制细菌及真核细胞的蛋白质合成。常作为实验用药。它作用于结合在核糖核蛋白体上相应部位的肽酰 tRNA,可使肽酰嘌呤霉素从核糖核蛋白体上游离出来。
嘌呤霉素是一种蛋白质合成抑制剂,它具有与tRNA分子末端类似的结构, 能够同氨基酸结合,代替氨酰化的tRNA同核糖体的A位点结合,并掺入到生长的肽链中。虽然嘌呤霉素能够同A位点结合,但是不能参与随后的任何反应, 因而导致蛋白质合成的终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟的多肽。
:pCas9/gRNA1 载体本身不带筛选标签。我们用带有嘌呤霉素和 EGFP 标签的载体 pLV-EGFP(2A)puro 和 pCas9/gRNA1 载体共转染,再用嘌呤霉素筛选转染成功的细胞。 简要步骤 设计靶点→构建 pCas9/gRNA1 载体→pTYNE 验证靶点→pCas9/gRNA1 载体转染 293T 细胞→挑选培养细胞克隆→测序验证基因敲除 靶点设计和基因敲除载体构建 人 TP53 基因有多个 mRNA 和蛋白拷贝,2 个转录起始位点,以及多个
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