Dihydrofluorescein diacetate

细胞增殖检测：CFSE

一、原理荧光染料CFSE， 也可称为CFDA SE（5，6- carboxyfluorescein diacetate，succinimidyl ester） 即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂，是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，这使得CFSE成为一种良好的细胞标记物。当CFSE以含有两个乙酸基团和一个succinimidyl ester功能基团的形式存在时，不具有荧光性质，而具有细胞膜通透性，能够自由进入

ROS的检测方法

探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。活性氧检测试剂盒[9]。荧光法检测线粒体产生和释放的反应性氧化物（ROS）[10]。羟基自由基的检测（二羟苄胺DHBAs和水杨酸盐Salicylate）[11] ROS was evaluated by the staining of 2’，7’- dichlorofluorescein diacetate（二氯荧光乙酰乙酸盐）.ROS production

共聚焦荧光探针标记方法

DMSO配成1mmol/L溶液，等份分装后，避光冷藏。 2. 染色步骤 将培养细胞用PBS（含Ca2+、Mg2+）洗2遍。加入Fluo-3 AM（终浓度1～5μmol/L），37℃孵育30～60min。用PBS（含Ca2+、Mg2+）洗2遍。激光扫描共聚焦显微镜观察。 可用Pluronic F-127助染。方法同上。 （五）CFDA测定细胞间通讯 1．储存液配制 CFDA即5-（6）-羧基荧光黄乙酰乙酸盐（5-(and-6)-carboxyfluorescein diacetate