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文献和实验。 外泌体分离方法有很多种,包括超速离心、过滤离心、密度梯度离心、免疫磁珠和商用试剂盒。但是这么多方法中,我们通常推荐选用超速离心法进行提取和分离,因为超速离心方法得到的外泌体不管是从得率还是纯度上都比较好。其他方法的特点如下: 过滤离心:得率比较低 密度梯度离心:步骤繁琐,得率较低 免疫磁珠:特异性比较高,得率较低 商用试剂盒:价格高,效果一般 综合以上,超速离心法是目前价格适中、得率和纯度都能兼得的一种方法。 四、如何鉴定外泌
1、外泌体提取纯化试剂盒如何保存? 室温保存(10℃~30℃),无需低温保存。温度过低时 ECS 试剂会出现冻结状态,此时用 65℃ 水浴 1 h 进行解冻即可。 2、外泌体提取纯化试剂盒能否分离纯化 200-1000 nm 直径的囊泡? 不能,本试剂盒不适用于直径大于 200 nm 囊泡的分离。粒径在 200 nm 以上的属于大囊泡,而非外泌体。 3、样品在提取外泌体之前是否可以低温保存? 可以。长期保存请放置于 -80℃,无需加冻存液;短期保存(1-2 天内)则放置于 4℃ 即可
过滤孔,导致膜的寿命减短,分离效率较低。同时,外泌体会粘附在膜上,导致产量降低。 免疫磁珠法:用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合,即可将外泌体吸附并分离出来。该方法分离得到的外泌体的生物活性易受 pH 和盐浓度影响,不利于下游实验。 试剂盒分离法:目前商业化的外泌体提取试剂盒多种多样,提取效果良莠不齐。同时试剂盒本身的价格比较高,且外泌体的得率和纯度一般,不是性价比高的一种分离方法。此方法得到的外泌体对于后续的鉴定实验、细胞实验和动物实验等可能有影响。 五、如何鉴定外泌
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