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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
见瓶身
- 保质期:
见瓶身
- 英文名:
CM Sephadex? C-50
- 库存:
999
- 供应商:
麦飞生物
- CAS号:
9047-08-9
- 规格:
50g
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文献和实验(一) 原理 DEAE-SephadexA-50(二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50)为弱碱性阴离子交换剂。用NaOH将CL-型转变为OH-型后,可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白属于中性蛋白(等电点为PH6.85~7.5),其余均属酸性蛋白。在PH7.2~7.4的环境中,酸性蛋白均被DEAE-Sephadex A-50吸附,只有γ球蛋白不被吸附。因此,通过柱层析γ球蛋白便可在洗脱中先流出,而其他蛋白则被吸附在柱上,从而便可分离获得纯化的IgG
r/min)20rain,除去其中少量的沉淀物,装入透析袋中,再置于烧杯中,用pH8.0缓冲盐水透析(0~4~C)过夜。⑤过柱 取透析过夜的标记物,通过葡聚糖凝胶SephadexG-25或G—50柱,分离游离荧光素,收集标记的荧光抗体进行鉴定。洗脱液:0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2);过滤量:12ml标记全球蛋白液(过滤前未透析);收集量:20ml(稀释1.7倍左右)。2.Chadwick法(1)试剂和材料 抗体球蛋白溶液、异硫氰酸荧光素、3%碳酸钠水溶液、0.01mol/L
荧光素FITC标记抗体的方法(Marsshall法、Chadwick法、改良法、透析标记法)
总蛋白量(AXB)=Crag。 c.C/20~C/10=Dmg(如蛋白含量低于20mg/mL,用C/10;如高于20mg/mL,用C/20)。 d.荧光素FITC的量:(1/50~2/100)×C=Emg。 e.巳0.5mol/L(pH9.5)碳酸盐缓冲液D/10=FmL。 f. PBS量D-(B+F)=GmL。 注:A为蛋白含量,mg/mL;B为蛋白质溶液的容积;C为蛋白总量,mg;D为常数,mg;正为荧光素的量,mg;F为碳酸
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